加急 微生物限度 薄膜过滤法 菌液组怎么做？

shgmp

中国药典中的微生物限度计数方法的验证中，  验证方法中有描述  “（2）菌液组   测定所加的试验菌数”，我们的产品是薄膜过滤法，请问这个菌液组试验，怎么使用薄膜过滤法测试。

清露紫苏

又再仔细看了一遍大家的讨论和药典，感觉菌液组的操作应该同试验组的最后一步操作一样，这样比较严谨。也就是说，采用薄膜过滤法，菌液组应该过滤一次后培养。
但还是认为如果采用薄膜过滤法，无论用的稀释剂是否与菌种的稀释剂一样，稀释剂对照组都应该做。
我的理解如下
试验组（供试品+菌液）：此处的菌液是在最后一步测试操作加进去的，主要是看样品在处理后是否还具有抑菌性
菌液组（菌液）：此处的菌液应该是稀释成的菌液，过滤一次后培养就可以了。
供试品组（供试品）：为了检测供试品本身的含菌量
稀释剂对照组（菌液）：用稀释剂代替供试品，加菌液，然后操作跟供试品的检测操作一样。这一项是为了考察最后一步冲洗之前的检测操作对菌种的影响。也就是hongwei2000说的除菌液操作之前的空白。
欢迎指正！

静夜思雨

菌液组的菌液不用过滤，直接将稀释后的菌液加到培养基中培养。

shgmp

静夜思雨 发表于 2014-2-20 18:08
菌液组的菌液不用过滤，直接将稀释后的菌液加到培养基中培养。

你的意思是即使供试液是膜过滤法，但是菌液组也不用过滤了，直接涂皿吗？
有的人说要过滤，现在很迷茫

孙艳红

过滤法： 菌液组：取试验菌液各1ml, 分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜贴于注有营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基的平皿中，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的菌数

孙艳红

常规法：  菌液组：取试验菌液各1ml,分别注入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的菌数。

shgmp

fsyylf 发表于 2014-2-20 21:44
过滤法： 菌液组：取试验菌液各1ml, 分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜贴于注 ...

如果我的稀释剂对照组中用的稀释剂也是生理盐水，那么这个稀释剂对照组实验是不是和菌液组实验就完全一样了，这两个实验是不是只做一个即可？

shgmp

另外，药典中说  若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组。
此处的供试液制备过程，是不是就是指的将配制好的供试品溶液在测试微生物时，过滤后，再将膜放到培养基表面呢？这里的过滤到底是制备过程中过滤，还是测试过程中过滤呢？

shgmp

期待高手的解答，谢谢

阿顺

静夜思雨 发表于 2014-2-20 18:08
菌液组的菌液不用过滤，直接将稀释后的菌液加到培养基中培养。

这个值得斟酌

阿顺

shgmp 发表于 2014-2-20 22:14
另外，药典中说  若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组。
...

楼主是不是没有说清楚？你可以组织一下语言。

静夜思雨

阿顺 发表于 2014-2-23 15:05
这个值得斟酌

斟酌什么呢?供试品过滤是为了去除产品中的抑菌物质,菌液组是为了测试本底菌数,和供试品没有关系,有必要过滤吗?

阿顺

shgmp 发表于 2014-2-20 21:48
如果我的稀释剂对照组中用的稀释剂也是生理盐水，那么这个稀释剂对照组实验是不是和菌液组实验就完全一样 ...

你可以多查资料，我有点忘记了，应该是直接加的，所以才要加稀释剂，跟你上次的问题呼应，你说供试液的缓冲剂有所不同，应该按供试液的缓冲剂来做。
后面还是有稀释剂的模拟，如果没有复杂的操作，是不需要稀释剂模拟操作，稀释剂这个就是为了模拟薄膜过滤操作，查看薄膜过滤过程（冲洗等操作对微生物的伤害），稀释剂对照组完全按供试液的配置过程做，为了模拟。
菌液组不需要。
我赞同菌液组的菌液不用过滤，直接将稀释后的菌液加到培养基中培养。
我有点记不清楚，我记得是要企业直接加，我当时也犹豫了好久，没有马上下结论。

阿顺

时间长了，忘记了，有错误不要见怪。我原来是做实验室主任的，做过所有的实验操作，尤其熟悉微生物的操作，但是楼主能如此提出这样的问题，竟然是我从来都没有考虑过，实在是丢人了。

阿顺

不过我很喜欢思考，如果有更多的人回答，我也许能提炼出好的答案，我帮你置前一周，希望检验高手来回答，我属于退役了。

阿顺

静夜思雨 发表于 2014-2-23 15:19
斟酌什么呢?供试品过滤是为了去除产品中的抑菌物质,菌液组是为了测试本底菌数,和供试品没有关系,有必要过 ...

还望你继续看我的发言和评价。当时还没有组织好语言。哈哈。

静夜思雨

阿顺 发表于 2014-2-23 15:39
还望你继续看我的发言和评价。当时还没有组织好语言。哈哈。

看你的回复是赞同我的观点的.

shgmp

shgmp 发表于 2014-2-20 22:14
另外，药典中说  若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组。
...

问题就是要说的膜过滤等特殊处理，此处的膜过滤处理是不是指的样品溶液进行微生物测试前进行制备过冲的过滤，比如可以过滤后直接涂平皿等，而不是将使用膜过滤法测试微生物呢？

shgmp

阿顺 发表于 2014-2-23 15:14
楼主是不是没有说清楚？你可以组织一下语言。

我重新组织了，焦点是此处的膜过滤特殊处理，是指在哪一步的膜过滤，是供试品溶液的制备处理，还是微生物测试的膜过滤。
比如有的样品可以膜过滤后，将膜再冲洗液浸泡后，再涂皿培养微生物？

shgmp

阿顺 发表于 2014-2-23 15:28
你可以多查资料，我有点忘记了，应该是直接加的，所以才要加稀释剂，跟你上次的问题呼应，你说供试液的缓 ...

朋友，我的疑问是稀释剂使用的是无菌生理盐水，这个和菌液组中使用的无菌生理盐水一样的，当然菌液组中还使用氯化钠-蛋白胨溶液，那是不是就不用进行  稀释剂对照组  实验了？

阿顺

我帮你置顶，然后继续查阅资料，大家一起提高。    专门做检验的都不一定知道，估计很难有人能准确回答，期待更好的答案。