加急 微生物限度 薄膜过滤法 菌液组怎么做？

阿顺

意思就你这个实验来说，你可以做也，可以不做，我建议做。  稀释剂对照组：取ph7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，其余操作同试验组。

阿顺

(1) 试验组: 分别取不同品种的1：10供试液1 ml、50~100个/ ml 试验菌株同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时观察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌.
(2) 活菌组 测定每一菌株的试验菌数
(3) 供试液对照 测定供试品本底菌数
(4) 稀释剂对照组

阿顺

这个是某个检验所，就你说的情况，他们显然没有做稀释剂对照组。

阿顺

前面我有说偏移的地方，这次我认真看你的题目，对不起。今天的回答我重新思考组织了一番。我拿我以前写的验证仔细看看，有时间，我再发表一番。

Archier.xu

原文：
（1）试验组 平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml 和50～
100cfu 试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2
个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低
稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu 试验菌，
过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。
（2）菌液组 测定所加的试验菌数。
（3）供试品对照组 取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
（4）稀释剂对照组 若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤
等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的
程度。试验时，可用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每
1ml 供试液含50～100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其
菌数。

分析：
试验组，即为样品阳性组，过滤的为：样品供试液＋菌液50-100CFU
供试品对照组，即为样品组，过滤的为：样品
稀释液组，过滤的即为稀释液，但有一个前提，（即需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤
等特殊处理时，这个应该是考虑特殊处理过程可能引入对检测结果的影响，如污染、损伤样品中微生物。）
最后菌液组，测定所加的菌数，这个应该是测定最原始加入的菌液的浓度，即为制备的菌液的浓度。所以采用涂布、倾注、过滤关键是看哪种方法的回收率可以接受。

我们公司其中一种产品为非无菌原料药，冻干粉。
检测也是使用膜过滤法，我们验证时：

样品组：供试液＋冲洗液
样品阳性组：供试液＋菌液＋冲洗液（这个冲洗液可以设置多个级别，如0ml,150ml,300ml，可以简单测定样品是否有抑菌性，以及确认最低可接受的冲洗液量,但不超过药典要求）
冲洗液组：冲洗液，即为阴性对照，我公司的冲洗液与样品供试液采用的稀释液都为NaCl-蛋白胨缓冲液pH7.0，确认冲洗液的无菌性
冲洗液菌液组：排除样品处理过程的干扰，如加入了中和剂\物理的分散离心，乳化剂等带来的结果的影响（我们的产品是没有任何处理，但仍做了这一项）
菌液组：涂布法，确认菌液浓度

当然我们产品主要是出口，方法是参照USP及Ph.Eur，但原理是相通的。供参考。