微限培养基的问题

小万..

1平皿中琼脂培养基用量有硬性要求吗，药典1105中有写15-20ml，但是有时培养时间长了培养基会干裂，能多加多少培养基（平皿倾注法/平皿涂布法/薄膜过滤法）
2倾倒培养基，平皿内起水雾凝水珠，太凉了倒皿培养基又会凝，如何解决
3平皿倾注法培养观察有时候菌会连成一片，如何解决

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Jpz77n2yf

培养皿内的培养基干裂：放入培养箱培养时尽可能远离风口，或是将平皿放入无菌的纸膜呼吸袋中培养。
平皿内起水珠：平皿倾注完后放置工作台内半开皿盖，等冷却后再盖上皿盖，会好很多，同时也可以避免连成片的菌落生长，部分运动性很强的菌除外（会长成片）。

逸清草堂

时间长了是多长，在规定时间内的我是没有遇到过，或者是你的条件太干燥了？
太热太冷的问题，搞个干式恒温器，妥妥的没问题
连成一片这种看一下规范就知道了怎么报告计数了

Jpz77n2yf

薄膜过滤法防止连成片，可以在贴膜后覆盖一层培养基

小万..

Jpz77n2yf 发表于 2024-03-21 14:11
薄膜过滤法防止连成片，可以在贴膜后覆盖一层培养基

那如果需要加铺一层培养基来控制菌落蔓延的话需要做验证吗，是做产品方法学验证还是做培养基适用性呢

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Jpz77n2yf

小万.. 发表于 2024-3-21 14:35
那如果需要加铺一层培养基来控制菌落蔓延的话需要做验证吗，是做产品方法学验证还是做培养基适用性呢

你可以在做方法验证时就按照这个方法做，最后算回收率。

小万..

Jpz77n2yf 发表于 2024-03-21 14:10
培养皿内的培养基干裂：放入培养箱培养时尽可能远离风口，或是将平皿放入无菌的纸膜呼吸袋中培养。
平皿内起水珠：平皿倾注完后放置工作台内半开皿盖，等冷却后再盖上皿盖，会好很多，同时也可以避免连成片的菌落生长，部分运动性很强的菌除外（会长成片）。

生物安全柜中做微限也可以开盖吗，因为我看洁净工作台是单层流，生物安全柜好像不是，所以这边没有开盖，怕会污染，每次做的沉降菌没有长菌，但是怕万一长菌了，微生物不是不可复测的嘛，就很纠结

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小万..

逸清草堂 发表于 2024-03-21 14:10
时间长了是多长，在规定时间内的我是没有遇到过，或者是你的条件太干燥了？
太热太冷的问题，搞个干式恒温器，妥妥的没问题
连成一片这种看一下规范就知道了怎么报告计数了

这边的培养箱都是生化培养箱，不是隔水式，所以说有可能是太干燥了加上培养时间长了，谢谢

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小万..

Jpz77n2yf 发表于 2024-03-21 15:19
你可以在做方法验证时就按照这个方法做，最后算回收率。

了解了，谢谢

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小万..

Jpz77n2yf 发表于 2024-03-21 14:11
薄膜过滤法防止连成片，可以在贴膜后覆盖一层培养基

这个产品的方法学做的是平皿倾注法，因为样品不容易溶于水中要加聚山梨酯80，这样的样品可以做薄膜过滤法吗，谢谢

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Jpz77n2yf

小万.. 发表于 2024-3-22 08:19
生物安全柜中做微限也可以开盖吗，因为我看洁净工作台是单层流，生物安全柜好像不是，所以这边没有开盖， ...

暂时还没遇到过，如果你怕污染，那你在平板倾注的时候尽量让你的培养基温度低一些，然后盖上盖平铺在生物安全柜中，应该不会有水珠的，最多有点雾气，影响不大。我原来因为赶时间然后培养基温度很高就倾注平板时会形成水珠。

Jpz77n2yf

小万.. 发表于 2024-3-22 08:22
这个产品的方法学做的是平皿倾注法，因为样品不容易溶于水中要加聚山梨酯80，这样的样品可以做薄膜过滤法 ...

那你加入吐温80后，样品是否溶了，你可以试一下薄膜过滤，不过我觉得大概率还是不好过滤。

greatwolf

正常来说。你的培养基45℃左右倾倒的时候不会有水珠，如果有，要么是环境湿度太高，要么是倾倒的时候温度太高（室温和培养基温差过大）。培养箱中培养的时候，一般情况下都是倒扣培养（即培养基再上，盖子在下），这时候即使有点点水珠，也不会影响培养。培养时间太长会导致培养基干裂这问题，要么是培养皿密封性不好、或者培养皿太靠近风口、或者培养时间超过十天半个月的。再一个就是成片的菌，做微限的时候都要求每天计数，总不会第一天就已经成片了吧？不建议搞完薄膜之后上面再铺一层培养基，万一这些菌都是需氧菌，有时候会出现假阴性。

Rabbi

greatwolf 发表于 2024-3-22 09:12
正常来说。你的培养基45℃左右倾倒的时候不会有水珠，如果有，要么是环境湿度太高，要么是倾倒的时候温度太 ...

是的。
菌连片这个还有除了注意数菌时间，（一般细菌1天都能长出来了）；还可以稍微降低加菌量，你平时加到90cfu的，可以减少一些至40-60之间，直观性会强很多。