微球初始污染菌供试液怎么制备

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

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粒径100微米以上的不溶于水的0.5克/瓶的微球（白色颗粒），需要做初始污染菌，目前在做修正系数的回收率，方法是用无菌水冲洗它，加100cfu的菌，用滤纸过滤掉白色颗粒，菌液留下来了，将留下的液体再薄膜过滤法计数。必须过滤掉颗粒，不然影响计数，但是发现回收率很低，应该是留在滤纸上很多菌，我想到用抽滤装置，可行不，选择50微米滤膜，过滤过程中，我的颗粒远远大于50微米，不至于堵了滤膜吧？网友们还有更好的办法吗？白色颗粒很轻，离心也不能完全沉底，离心的话，菌应该也会沉底。

爱吃鸡蛋的橘子 · 发表于 4 天前

白色不溶性颗粒应该是可以和菌区分的，建议采用超声系统+平板涂布法试试

永恒12 · 发表于 4 天前

试试直接过滤培养，把培养时间延长，微生物和微球应该能区分出来

Chowvine · 发表于 4 天前

不适用于薄膜过滤就只能用平板法把

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

爱吃鸡蛋的橘子发表于 2025-4-10 14:35
白色不溶性颗粒应该是可以和菌区分的，建议采用超声系统+平板涂布法试试

假如用5毫升无菌水加到粉末里，涂布法涂0.1ml，未长菌，最后结果报告小于50，我们定的限值是小于2，这还是一种培养基，如果用两种怎么计算

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

永恒12 发表于 2025-4-10 15:34
试试直接过滤培养，把培养时间延长，微生物和微球应该能区分出来

由于初始污染菌限值很低，所以是合并5个样品一起过滤（参考19973.1），膜上会有很多白色颗粒，倒置培养，都洒了……

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

Chowvine 发表于 2025-4-10 15:59
不适用于薄膜过滤就只能用平板法把

平板法怎么计算呢？假如，加5毫升无菌水，吸1毫升到TSA，1毫升到SDA，结果是TSA上的菌落数*2.5+SDA上的菌落数*2.5吗

ch192925 · 发表于 4 天前

对，试试平皿倾注或涂布法

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

墨鱼丸rpk 发表于 2025-4-10 21:24
平板法怎么计算呢？假如，加5毫升无菌水，吸1毫升到TSA，1毫升到SDA，结果是TSA上的菌落数*2.5+SDA上的菌 ...

不对，是各5

墨鱼丸rpk · 发表于 4 天前

ch192925 发表于 2025-4-10 21:30
对，试试平皿倾注或涂布法

如果实验好几次发现SDA不长菌，只用一种培养基可以吗？不然计算结果偏大，选择灭菌剂量就大，会对理化项目的分子量有影响

Chowvine · 发表于 3 天前

墨鱼丸rpk 发表于 2025-4-10 21:24
平板法怎么计算呢？假如，加5毫升无菌水，吸1毫升到TSA，1毫升到SDA，结果是TSA上的菌落数*2.5+SDA上的菌 ...

如果微生物负载很低，可以取冲洗液震摇冲洗你的微球，然后冲洗液用薄膜过滤法检测。通过多次重复，计算校正因子就好了

爱吃鸡蛋的橘子 · 发表于 3 天前

Chowvine 发表于 2025-4-11 08:39
如果微生物负载很低，可以取冲洗液震摇冲洗你的微球，然后冲洗液用薄膜过滤法检测。通过多次重复，计算校 ...

如果每瓶加缓冲液1ml，再加菌0.1ml,洗脱后，直接取1.1ml涂布培养？只要回收率合格即可，不知道你这个初始污染菌的标准是不是 XX cfu/瓶？

永恒12 · 发表于 3 天前

墨鱼丸rpk 发表于 2025-4-10 21:17
由于初始污染菌限值很低，所以是合并5个样品一起过滤（参考19973.1），膜上会有很多白色颗粒，倒置培养， ...

1.限值低不是问题呀，关键是你的做回收率验证的时候要能达到就行了呀，19973也没说一定要5个合并一起呀。你现在5个一起做回收率，那以后产品测试也是5个作为一个供试品来测试的这样你的检验成本变大了，没必要
2.你取1个，用100ml缓冲液超声/旋涡，时间等参数自己摸索，或者加入一些表面活性剂（自己多摸索），过滤，试试培养的时候不要倒置

永恒12 · 发表于 3 天前

永恒12 发表于 2025-4-11 10:27
1.限值低不是问题呀，关键是你的做回收率验证的时候要能达到就行了呀，19973也没说一定要5个合并一起呀。 ...

或者你直接每个样品加1ml或者10ml缓冲液，然后0.1ml菌液，倾注平板试试

墨鱼丸rpk · 发表于前天 07:01

永恒12 发表于 2025-4-11 10:27
1.限值低不是问题呀，关键是你的做回收率验证的时候要能达到就行了呀，19973也没说一定要5个合并一起呀。 ...

用5个样本量，是19973中提到对于负载小的产品可以合并几个样本。若用一个样本，若不长菌，检测限是tsa+sda<4/件（还未考虑修正系数）。若用5个，除以5，就是0.8了，可以更好的降低初始污染菌的数据，因为我们的产品的分子量受辐照剂量影响有点大。如果真的合并行不通，只能不合并，或者5个合并，100毫升冲洗液，再取10毫升过滤到膜上，这样检测限就是8了……

墨鱼丸rpk · 发表于前天 07:11

墨鱼丸rpk 发表于 2025-4-12 07:01
用5个样本量，是19973中提到对于负载小的产品可以合并几个样本。若用一个样本，若不长菌，检测限是tsa+sd ...

领导说，限值暂定<2/件，我说做不到，说让我试试别的办法，可以稍微高一点……

墨鱼丸rpk · 发表于前天 07:12

爱吃鸡蛋的橘子发表于 2025-4-11 09:50
如果每瓶加缓冲液1ml，再加菌0.1ml,洗脱后，直接取1.1ml涂布培养？只要回收率合格即可，不知道你这个初始 ...

涂布培养都是涂布0.1吧，样品1毫升冲洗也太少了，冲不起来。可以加10毫升，用1毫升倾注平板

微球初始污染菌供试液怎么制备

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