微生物侵入法，试验步骤，求大神解答

NANAfhx

求大神解答，没做过实验纯小白，第一次就做这种实验，真的太难了
刚到手的铜绿假单孢菌，怎么配置成菌液浓度为10~100CFU/0.1ml？

微生物侵入法中的菌液、菌悬浮液和菌悬液是同一种东西吗？

微生物侵入法之后用直接接种法，是把外包装消毒之后直接把里边的培养基放到培养皿中，置恒温箱直接培养吗？

求帮助，蟹蟹蟹蟹蟹蟹!!!!!!!!!!!!!!!!

NANAfhx

路过的各位大神求解答，提前感谢

406138035

菌液浓度用比浊管对比

九九swx

看GMP指南呀406页，你这个课件明显是有问题的

九九swx

菌悬液浓度建标曲，然后紫外测浓度；或者点板计数。法规要求10的5次方cfu/ml

诺诺ヘ

首先看你到手的菌是什么状态的
0代标准菌株，需要复苏传代到第三代才可以作为工作菌株使用，使用前可以稀释菌液做预实验，注皿培养确认原始菌液浓度之后再进行实验。或者用比浊法确认
如果购入的是三代工作菌株，COA上应该是有菌液浓度的，按照说明书进行稀释使用就可以了
一般来说菌液指的是在培养基肉汤中的状态，菌悬液指的是稀释过后的
微生物侵入法之后，一般取实验中未染菌的培养基，加入定量的菌悬液再进行培养，确认培养基有促生长作用

Skydpy

置于菌液4小时后清除干净瓶外残留菌液，直接将瓶子置于培养箱培养就行了，倒达培养时间后观察瓶内TSB是否变混浊，变混就是染菌，状态不变就说明挑战成功

鬼使神差

配置铜绿假单孢菌菌液

预培养：首先将铜绿假单胞菌接种到合适的液体培养基中（如营养肉汤），在适宜的温度（通常是37°C）和振荡条件下培养，让细菌繁殖到一定浓度。
比浊法粗测浓度：可以使用比浊仪初步测量菌液浓度。通过与标准比浊管对比，估算菌液大致的浓度范围。如果没有比浊仪，也可以凭经验大致判断菌液的浑浊程度。
系列稀释：如果菌液浓度过高，需要进行稀释。例如，先进行10倍系列稀释。取1ml菌液加入9ml无菌生理盐水，充分混匀，此时得到10⁻1稀释度的菌液；再从此稀释液中取1ml加入9ml无菌生理盐水，得到10⁻2稀释度的菌液，以此类推。
平板计数法确定浓度：将不同稀释度的菌液取0.1ml涂布于琼脂平板上，每个稀释度做3 - 5个平行。在适宜温度下培养一定时间（如37°C培养18 - 24小时）后，对菌落数进行计数。根据菌落数（CFU）和稀释倍数，计算出原始菌液浓度，找到符合10 - 100CFU/0.1ml要求的稀释度。

菌液、菌悬浮液和菌悬液

在微生物学中，这三个概念基本是相同的。它们都是将微生物（如细菌）分散在液体介质（如水、缓冲液、培养基等）中的液体形式，目的是方便对微生物进行操作，如计数、接种等。

微生物侵入法后的直接接种法

不是简单的消毒外包装后把培养基放入培养皿培养。正确的做法是，先对外包装进行消毒，防止外部杂菌污染。然后在无菌操作条件下（如在超净工作台中）打开包装，将里面的样品（如果是固体培养基可以是接种后的琼脂平板、斜面试管等；如果是液体培养基可以是接种后的肉汤等）转移到合适的培养容器中，置于恒温箱在适宜的温度和气体条件下（根据微生物种类不同，如好氧菌需要充足氧气，厌氧菌需要无氧环境）进行培养。

NANAfhx

鬼使神差 发表于 2024-11-21 19:50
配置铜绿假单孢菌菌液

预培养：首先将铜绿假单胞菌接种到合适的液体培养基中（如营养肉汤），在适宜的 ...

感谢，感谢，非常感谢！！！

NANAfhx

九九swx 发表于 2024-11-21 16:31
看GMP指南呀406页，你这个课件明显是有问题的

谢谢分享

咿咿呀呀ac1

鬼使神差 发表于 2024-11-21 19:50
配置铜绿假单孢菌菌液

预培养：首先将铜绿假单胞菌接种到合适的液体培养基中（如营养肉汤），在适宜的 ...

捉到一个传奇！！！