上篇：【耀文解读】LNP分法合集：HPLC-CAD检测mRNA-LNP脂质组分

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[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]导读：新冠疫情的爆发加速了mRNA疫苗技术的产业化，mRNA技术是生物制品的一大突破。与其他传统等疫苗相比，mRNA疫苗具有安全性高、体液及细胞免疫双重机制、工艺简单、低成本等诸多优点。因此，它们在处理大规模和新出现的流行病方面具有突出的优势。然而，mRNA疫苗也存在不稳定、免疫原性高、递送效率低等缺点。脂质纳米颗粒LNP被广泛用作mRNA疫苗的递送系统，以进一步提高mRNA疫苗的稳定性和转染能力。对LNP中单个脂质组分进行鉴别和定量检测是RNA疫苗/疫苗开发和生产阶段的关键质量属性。

一、脂质体简介

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]mRNA疫苗递送的LNPs系统(如图1)，使用以下四种类型的脂质体：具有胺官能团的阳离子脂质，通过离子相互作用与mRNA相互作用；脂质-聚乙二醇偶联物，胆固醇和两性离子辅助磷脂。脂质体在储存和运输过程中容易聚集和降解，影响了COVID-19 mRNA疫苗的效率和安全性。对单个脂质进行定量监测控制不仅支持工艺和配方开发，也是疫苗生产的关键质量属性，需要在生产和放行阶段严格控制。

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]以LNP作为递送系统的几款RNA药物已获批上市。全球首款上市的RNA药物Onpattro将siRNA包裹在由DLin-MC3-DMA、DSPC、PEG2000-DMG和Cholesterol组成的LNP中；而Pfizer-BioNTech和Moderna的两款mRNA疫苗中的LNP组分分别为：mRNA1273（SM-102、PEG2000-DMG、DSPC和Cholesterol），BNT162b2（ALC-0315、ALC-0159、DSPC和Cholesterol）。

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图1 LNP递送系统二、HPLC/UHPLC-CAD 工作原理

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]高效液相色谱（HPLC）是药物分析中常用的现代分析技术。由于其高效率、高速度、灵敏度和自动化，它被广泛用于药物分析。超高效液相色谱 (UHPLC)则比HPLC耐高压高温，可使用更小粒径的色谱柱，以实现更高的分辨率，同时缩短分析时间。多种不同的检测器可与HPLC配合使用，以满足不同物质的分析要求，包括紫外检测器（UV）、折射率检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱仪（MS）和脉冲安培检测器（PAD）。

带电气溶胶检测（CAD）是过去十年中发展起来的一种新型通用探测器。其特性包括与梯度洗脱的兼容性，不依赖于物质的结构特性和电离效率的响应值，以及检测非挥发性和半挥发性物质的能力。当CAD检测器与HPLC结合使用时，HPLC淋洗液在CAD检测器的雾化室中通过氮气碰撞雾化。含有分析物的较小液滴在室温下干燥形成溶质颗粒。粒子表面通过与带电的氮气碰撞而带正电。具有低负电压的离子阱装置以高迁移速率去除多余的带电氮，具有低迁移速率的带电分析物颗粒将其电荷转移到颗粒收集器。最后，通过高灵敏度的静电检测装置测量分析物的电荷并将其转换为电信号。信号强度与溶质的质量成正比。用于药物分析的液相色谱法和CAD检测已被列入各国药典。由于CAD的高度灵敏性，可以检测更大范围的脂质含量。