电泳还原性和非还原性区别

生物制药Q · 发表于 2023-4-14 10:39:48

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小白表示不懂检测，请大佬明示

六月六的牛 · 发表于 2023-4-14 13:15:33

非变性电泳（Native-PAGE）和变性电泳（SDS-PAGE）。非变性电泳，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开；而变性电泳（SDS-PAGE）仅根据蛋白质亚基分子量的不同分开蛋白质（可以忽略电荷因素）。SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。

可以理解为针对样品说的，一个是蛋白没有发生变性，保持了原来的蛋白结构状态，一个是通过了使用例如强还原剂等对其进行变性处理，可使其结构发生变化。非变性电泳可以用来回收蛋白进行测序。

生物制药Q · 发表于 2023-4-15 17:27:32

六月六的牛发表于 2023-4-14 13:15
非变性电泳（Native-PAGE）和变性电泳（SDS-PAGE）。非变性电泳，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态 ...

谢谢
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张寅 · 发表于 2023-4-17 10:29:17

举个例子
一般抗体是由两条轻链和两条重链组成的，由二硫键连接的，大概分子量是150kD
非还原电泳，就是抗体整个蛋白，跑胶，正常条带出现在150kD附近的，如果300kD附近出现条带(我们常用的胶看不到）说明有聚体。或者除了150kD还有其他条带，说明蛋白不纯。
还原电泳，就是加还原剂(DTT等)，打开二硫键(把轻链和重链打开)，跑胶，正常会有两条条带出现，分别在25kD(轻链)和50kD(重链)。如果25kD处有明显的两条带，那说明表达出来的轻链有两种，不是单一的。

生物制药Q · 发表于 2023-4-19 17:44:25

张寅发表于 2023-4-17 10:29
举个例子
一般抗体是由两条轻链和两条重链组成的，由二硫键连接的，大概分子量是150kD
非还原电泳，就是 ...

谢谢。。。。。。。。。。。。。。。。。