生物指示剂的培养结果与等效灭菌时间的对应关系

calm1709

最近在研究灭菌柜验证，灭菌程序是121℃，30 min，采用过度杀灭法，要求F0≥12 min。

微生物挑战用的是自含式生物指示剂，N0=1×106，D121=1.5。合格标准是灭菌后培养为阴性。

这里我遇到两个问题：

1.培养结果为阴性是代表灭菌后的NF=1×100吗？我看PDA TR61里面是这么计算的。还是按照国标GB 18281.1-2015附录E中公式：指示剂杀灭时间≤（lgN0+4）×D。来按照NF=1×10-4来计算？

2.如果用NF=1×100来计算的话，达成这个目标所需的等效灭菌时间为9 min，是目标F0=12 min的75%，也就是说我应该用一个75%的灭菌时间程序去完成微生物挑战？即121℃灭菌22.5 min?

或者干脆换个D值更高的指示剂来用？

编辑好的符号上标和下标帖子一发布就全没了，但愿不会影响理解吧。

新61ecc945

这牛角尖钻的，角度清新。哪条法规规定必须挑战等效灭菌时间点？涵盖在你灭菌参数内就可以了啊。你是验证，不是开发。

小树冲冲

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calm1709

新61ecc945 发表于 2023-4-13 17:59
这牛角尖钻的，角度清新。哪条法规规定必须挑战等效灭菌时间点？涵盖在你灭菌参数内就可以了啊。你是验证， ...

我的疑问：F物理肯定大于12min，但是F生物这个指标看不出来是多少，按照买的指示剂来看只能证明大于9min。这个指示剂杀灭的效果没法证明我达到了足够的灭菌时间。

新61ecc945

暴晓博 发表于 2023-4-14 10:17
我的疑问：F物理肯定大于12min，但是F生物这个指标看不出来是多少，按照买的指示剂来看只能证明大于9min ...

9min都到达了效果，比实际灭菌时间小，为什么不能证明

3075589379

NF等于10^0时，长菌概率为63%，也就是如果使用100个BI，约63%的BI会呈阳性。
BI全部为阴性时，存活概率大概在10^(-2)以下，可以这样估算：验证时使用的BI数量一般不超过100个，100*0.01=1，BI数量再少一点就小于1了，也就是不到1个BI为阳性。
杀灭时间对应的存活概率为10^(-4)，这个时候基本不会检测出阳性BI了。

因为实际使用的BI数量比较少，重复次数也有限，BI全部为阴性时，并不能一定反推出存活概率就是多少，对应的存活概率可能在10^0到10^(-4)之间，PDA TR61里面的取值是保守值。

3075589379

暴晓博 发表于 2023-4-14 10:17
我的疑问：F物理肯定大于12min，但是F生物这个指标看不出来是多少，按照买的指示剂来看只能证明大于9min ...

所以你的疑问是没有问题的，做实验得到的BI全部为阴性的结果，只能证明至少下降了6个对数值，也就是F0>9min。

在环氧乙烷灭菌验证中，会要求做半周期，得到BI全部为阴性的结果，然后灭菌时间是半周期的2倍，这样对数值就至少下降了12。
不过湿热灭菌验证似乎并不要求做这样的挑战，另外可能也很难买到更高D值的生物指示剂。
具体可以参考一下下面的帖文
https://www.ouryao.com/thread-242300-1-1.html

calm1709

3075589379 发表于 2023-4-14 15:28
所以你的疑问是没有问题的，做实验得到的BI全部为阴性的结果，只能证明至少下降了6个对数值，也就是F0>9m ...

好的，多谢，我学习一下

陈小诗1

您加我，13641300480，我们是生物指示剂总代理，我回复您

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danhuang258

PDA TR1中 过度杀灭法灭菌验证要求 灭菌程序F0和生物指示剂Fbio都要大于12min。建议楼主做验证的时候选择D值大于2.0的生物指示剂。

calm1709

danhuang258 发表于 2023-4-21 11:19
PDA TR1中 过度杀灭法灭菌验证要求 灭菌程序F0和生物指示剂Fbio都要大于12min。建议楼主做验证的时候选择D ...

D值大于2.0的指示剂或许还好找，但是同时还得要求孢子数大于10^6的才行，我们买标示10^6的自己实测也只有5*10^5。
TR1毕竟只是个报告，国标和指南里都没有具体规定，所以才让人摸不着头脑。

danhuang258

生物指示剂计数不准确的原因有很多种，楼主私信我，相关问题可以讨论一下。GB18281、ISO11138只有指示剂参数要求范围，没有明确各类验证的指示剂怎么选，主要还是看各厂家的需求。楼主也可以看一下CDE的《化学药品注射剂灭菌和无菌研究及验证指导原则》。

不许嵩手

杀灭时间≤（lgN0+4）×D,相当于加了4个保险系数，PDA TR1里有一句话，加2/3个保险系数是平衡F0跟FBIO的最佳范围，我们加两个保险系数来算一下：
N0假设1×106，D121假设1.5，加两个保险系数计算公式如下FBIO=（lgN0+2）×D，
将数据带入计算，结果为12，这样可同时满足F0与FBIO大于等于12min的要求；
另外我前阵子也因为BI灭菌后阳性发生了一个偏差，根据调查结果，也可以佐证这个公式比较接近实际FBIO，
我们公司有一个为灭菌程序为121℃，20min，理论F0值为20min，实测22min左右，用的BI D值为2.7min，N0为2.3×106，按照不加保险系数的公式 lgN0×D 计算，17.17min即可完成灭杀，但从实际培养结果来看，阳性数量远大于阴性；
按（lgN0+2）×D  计算，FBIO=22.6,恰好与实测F0接近，故有部分BI呈阳性，部分呈阴性，因为这个偏差查询了往年的BI D值，最高为2.4min，按照加2个保险系数的公式来算，FBIO为19min，故往年验证通过；
另外，中国药典里对湿热灭菌的BI D值也有规定，为1.5min~3.0min，反推一下，即可得出计算FBIO的最佳公式为（lgN0+2）×D
还有很多其它能佐证的，我就部一一列举了

calm1709

不许嵩手 发表于 2023-4-24 15:34
杀灭时间≤（lgN0+4）×D,相当于加了4个保险系数，PDA TR1里有一句话，加2/3个保险系数是平衡F0跟FBIO的最 ...

多谢，学习了。

woshiwangkai

不许嵩手 发表于 2023-4-24 15:34
杀灭时间≤（lgN0+4）×D,相当于加了4个保险系数，PDA TR1里有一句话，加2/3个保险系数是平衡F0跟FBIO的最 ...

哪边有logno+2这个说法，怎么看出来的求教