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为确保生产的可持续性和产品质量的稳定，需提供检定合格、质量相同、持续稳定的细胞，相应的细胞库应当被建立，从而保证每个产品都有一个经过检定的共同起始源的细胞。
根据2020版《 中国药典》，细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。
ICH Q5D中也有写到：用连续传代培养的细胞生产生物技术产品及生物制品的最大优点是每批产品都有一个经检定过的共同起源，即保存的细胞库。
细胞库的完整生命周期通常包括：原始细胞库（Primary Cell Bank, PCB）的检测、主要细胞库（Master Cell Bank, MCB）和工作细胞库（Working Cell Bank, WCB）的建库、MCB和WCB的检定放行、细胞库的长期存储、细胞库的转移或销毁退还。 一、PCB的检测 PCB一般建立在实验室条件下，由RCB复苏、扩增得到。RCB的建立需经历载体的构建、转染、细胞群的筛选、单克隆细胞株的筛选等步骤。在用于后续建库前，至少需要确保在其检测中能做到无菌生长和未检测到支原体，同时展开相应的细胞稳定性研究。 二、MCB和WCB的建立 取PCB通过复苏、传代、扩增后，在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，以一定的活细胞密度定量分装于冻存管，保存于液氮中，经全面检定合格后，即可作为MCB。而与MCB建立不同的是，WCB是由MCB复苏得到。
在建立过程中，最重要的是避免污染。若细胞库发生了污染，或者存在污染的可能性，则该细胞库需要被废弃。尽管后续会进行相应的检测，但是无法做到对每一支细胞都进行检测，所以在细胞库的建立过程中应对各类污染做好良好的预防。
细胞在冻存和复苏过程中应做到“缓慢冻存，快速复苏”。应通过加入二甲基亚砜或甘油等冻存剂，在缓慢降温的条件下对细胞进行保存，能够有效减少冰晶的形成，从而预防冰晶损伤、电解质升高、脱水、蛋白质变性等损伤；在快速复苏的过程中，细胞能够迅速通过最易受损的-50°C ~ 0°C的温度区间，细胞内较大冰晶的形成能够被抑制，从而使细胞在复苏后能够拥有较好的生长特性，通常4分钟的37°C水浴能够满足快速复苏的条件。
细胞库的冻存数量应充分考虑到后续生产、检定需要、保藏年限，检测用数量、复检频率，遵循够用原则，通常200支左右能够远远满足需求。 三、MCB，WCB的检定放行 细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、外源因子和内源因子的检查、成瘤性/致瘤性检查等。必要时还须进行细胞生长特性、细胞染色体检查，细胞均一性及稳定性检查。这些检测内容对于MCB细胞和WCB细胞及生产限定代次细胞均适用。关于细胞库的检定，中国药典、美国药典(USP)、国际人用药品注册技术协调会(ICH)及其余组织的规定，并且结合相关的项目经验，总结以下表格。 表1. 细胞检定项目要求
Y：必检项目 (Y)：根据细胞特性、传代历史、培养过程等情况要求的检定项目 -：为非强制检定项目 *：至少需要取前，中，后，至少三个冻管 此外为确保用于生产的细胞的目的基因的稳定性，需进行稳定性检测的项目及方法依据产品的特性确定。通常通过建立EOPC，确保MCB/WCB与EOPC之间的一致性，包括遗传稳定性（如插入基因拷贝数、插入染色体的位点、插入基因的序列等）、目的基因表达稳定性、目的产品持续生产的稳定性、以及一定条件下保存时细胞生产目的产品能力的稳定性等资料。
在IND申报阶段，细胞库的建立一般只需要提供摘要性表述。但是在BLA阶段中，相应的信息都应当被详细完整的描述，并提供可追溯性的文件。其中包括所有遗传元素的起源、如何对其进行修饰、如何利用它们进行重组表达体的构建以及如何对所有这些遗传元素及操作过程进行控制、克隆及细胞基质筛选历史等等。 四、细胞库的储存 细胞库通常储存在液氮罐中，为防止爆管和罐内样品污染，推荐使用气相液氮罐进行细胞库的储存。建议在不同厂区、城市建立两个或以上细胞库储存地，即使一个细胞库储存地发生未预期的事故或灾害等，另一个储存地细胞库仍然可用于生产，确保细胞库储存的安全性使用。同时也应对放行和未放行的细胞库放置在不同的液氮罐中进行储存。 五、细胞库的转移、销毁 细胞库的转移应当保持在一定的温度下，在转运中过程中应做好对于温度的监测。通常采用干冰或者液氮作为其保存的介质。
细胞库的销毁应在多方的批准和见证下进行，一般为将冻存管盖子打开、浸泡在消毒剂中，或将冻存管进行灭菌。 六、细胞库的风险控制 细胞库无论是对于整个工厂，还是相应的项目，都具有十分重要的意义，因此需要对细胞库做好充分的风险控制。
一旦细胞库发生污染，会造成严重的后果。工厂需开展相应的污染调查，对所有有可能受到污染的区域进行清洁，并制定相应的预防措施。在调查和清洁期间，相应的区域也无法开展生产工作。
例如，通常情况下可以从细胞株的构建开始，尽可能使用尽量使用成分明确的非生物来源材料，避免从源头引入污染。在细胞库引入 GMP车间前，应做好细胞库中病毒/支原体的检测与确认，确保细胞库的无病毒和无支原体。生产中，可以对细胞收获液进行检测，确认其状态。只有做好细胞库的检测、建立、储存和转运，才能最大限度地避免污染，尽可能的控制其风险。
结 语
奕安济世目前在洁净等级B级的洁净车间内进行细胞培养，在A级的生物安全柜内进行细胞的传代和建库，均符合GMP要求；传代与建库过程中同时进行动态环境监测，包括浮游菌（Airborne Microbe），沉降菌（Setting Microbe），表面菌（Surface Microbe），五指手套（Glove Point）和悬浮粒子（Particle）；细胞培养及建库过程中使用的物料均通过GMP放行，确认其无动物源原物料；直接与细胞接触的耗材均为一次性使用，均为无菌耗材；在最大程度上满足了洁净的需求和微生物控制。
奕安济世在建库工艺的开发和细胞培养及建库的操作人员都具有丰富的无菌操作经验，完成了超过50个批次的MCB、WCB的建立，在复苏后具有极佳的细胞活率。目前已实现100+E6 cells/mL密度的建库，确保在5L摇瓶中直接进行复苏，有效地缩短了细胞从复苏到产品阶段的代次。
奕安济世通过自动化系统可实时进行监测记录，超温时自动进行报警发送避免后续危害的发生；并且在两个不同地点均设立了细胞房进行细胞库的储存，让细胞的长期储存更加安全，并通过完备的文件系统，对细胞库的管理进行了详细的记录。
奕安济世的CMC团队具有丰富的项目经验，在细胞库建库中速度快，效率高，细胞活力好，确保细胞在生产、测试中具有稳健的性能。
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发表于 2023-1-13 09:38:25
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