中药遇上HPLC

zhibo_liu

当中药遇上HPLC

—使用HPLC指纹图谱鉴别白芍与赤芍

前言

白芍和赤芍属于芍药科芍药属，是同一物种的变种。两者名字中的颜色不是指花的颜色，而是指根的颜色。

在中药中，白芍和赤芍是许多不同药剂配方中使用的重要药材。赤芍在中医中的主要作用是祛血热、活血化瘀，它最重要的用途和适应症是流行性热症的麻疹，呕血，鼻出血，疼痛的红肿眼睛，肿胀，脓肿和疖子等。而白芍最好用作补血补品，也可用作“减热”(或“除热”)肝药。根据中医方法学和理论，白芍有助于治疗腹痛和肌肉痉挛。另外，中医也相信它对出汗也有收敛作用，而且在本质上是抗菌、抗痉挛和抗炎的。

                              

为了确保两种芍药品种的鉴别，我们开发了一种HPLC指纹图谱方法来区别两个芍药品种。

结果

对芍药根样进行了分析，表明赤芍和白芍的植物源提取物是不一样的。同时也对芍药配方颗粒提取物进行了测定，并与原植物样品提取物进行了比较，以说明其与赤芍或白芍之间的关系。此外，赤芍和白芍两个样品中主要的活性成分——芍药苷，能很好地被分析标准所识别。图1显示了赤芍和白芍的植物提取物的HPLC图谱，芍药苷在13.40min处被检测到。赤芍的特征组分的保留时间为26min，它在白芍样品中没有被检测到。图2显示了赤芍配方颗粒提取物与赤芍植物提取物的HPLC图谱。有三种组分（保留时间为21.34、22.33、22.63min)在颗粒物提取物中被检测到，但是植物提取物中未发现。

RT:26min 赤芍特征组份

      

RT:13.4min  芍药苷

      

图1.  赤芍（蓝色）和白芍（红色）植物提取物的HPLC谱图

芍药苷

  

图2.  赤芍配方颗粒（蓝色）和赤芍植物提取物（红色）的HPLC谱图

材料与方法

采用 KNAUER AZURA HPLC plus四元梯度液相色谱系统，结合具有表面多孔填料的 KNAUER Eurospher II100-5 C18 P silica 色谱柱，建立了芍药样品的HPLC分析指纹图谱方法。

仪器配置

配置	描述
AZURA P 6.1L	四元梯度泵，0.001~10ml/min,700bar，带脱气机
AZURA AS 6.1L	自动进样器，700 bar，100 μl定量环
AZURA DAD 2.1L	二极管阵列检测器，190~700 nm
流通池	分析型高压流通池，光程10 mm, 体积10 μl
AZURA CT 2.1	柱温箱，5 – 85  °C
色谱柱	Eurospher II 100-5 C18 P, 250  x 4.6 mm，5μm，带预柱
软件	ClarityChrom 或 OpenLab

关于该方法和配置的更多详情，请联系北京绿绵科技有限公司

HPLC方法

色谱柱：Eurospher II 100-5 C18 P, 250 x 4.6 mm，5μm，带预柱

流动相：A：Water + 0.05 % 磷酸；B：乙腈

梯度：0~60min，95% A + 5% B；

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

进样体积：10μL

检测波长：230nm。

结论

本方法给出了白芍和赤芍提取物的差异，赤芍配方颗粒和根提取物的差异也可以采用该方法进行区别。赤芍和赤芍配方颗粒均检测到保留时间为26min的峰，而白芍未检测到此峰，该峰可作为区别赤芍和白芍的特征峰。

赤芍配方颗粒和赤芍的HPLC指纹谱图非常相似，只是芍药苷浓度不同。赤芍配方颗粒含有赤芍没有的三个特征峰，可能和它们原料的栽培相关。

zhibo_liu

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Chenyuanfeng

白芍和赤芍从外观还是比较好区分的，还有两者的价格也差不少，似乎没有必要用HPLC来鉴别。

孙茂

白芍和赤芍都为毛茛科