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据英国《自然》杂志网站2月15日报道,美国专利和商标局(USPTO)当天裁定,麻省理工学院(MIT)和哈佛大学的博德研究所(Broad Institute)的专利,与加州大学伯克利分校的发现并不“冲突”,博德研究所可以保留其CRISPR的专利权。 如何看待其背后的利益? 张峰博士2017年在Science发表的文章《Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2》中提到,将C2c2与恒温扩增结合起来,开发了基于CRIPSR的快速DNA和RNA检测试剂(CRISPR-Dx),此试剂的检测精度可达单个原子和单个碱基级别。我们用此C2c2系统(SHERLOCK)检测了赛卡病毒、登革热病毒,并进行了人DNA分型、循环肿瘤细胞DNA检测。此外,SHERLOCK系统具有常温、长期存储的优点,易于开发为检测试纸,适合野外应用。 可以说,单就在医疗诊断上,CRISPR技术还有更多未知的潜在价值。 其次,在张峰博士同年在Nature发表的文章《Genome-scale activation screen identifies a lncRNA locus regulating a gene neighbourhood》中提到,哺乳动物的基因组中包含大量转录的长链非编码RNAs(lncRNAs)的基因,其中一些已被证实为在细胞中发挥关键作用。虽然一些lncRNA作用对象并非在其编码基因的附近,但也有证据表明许多lncRNA能够调节其编码基因附近的基因。在这里,我们开发了一个基因组规模的CRISPR–Cas9文库,可激活超过1万个lncRNA的转录起始位点,用于筛选表型相关的lncRNA。我们发现在人的黑色素瘤细胞中,11个lncRNA位点与BRAF小分子抑制剂的耐药性有关。 这也说明,CRISPR技术在医药行业内同样很大的潜在价值。 科学家们也已证实,利用CRISPR可以治疗小鼠的肌肉萎缩、罕见肝脏疾病;去年11月,中国科学家首次在人类身上试用CRISPR治疗肺癌;还有一些研究显示,CRISPR技术可用来治疗艾滋病,拯救濒危物种等。 如何应用CRISPR技术? 在张峰博士连续在多篇关于CRISPR技术的文章在Nature上发表之后,整个生物行业顿时轰动,纷纷投入其中,期望能领先别人一步研制出CRISPR产品。 确实,在大量资源投入下,不少生物公司已研制出可投入使用的CRISPR产品。其中,往圣生物科技公司更是利用CRISPR技术推出了CRISPR/Cas9文库,建立了CRISPR/Cas9 基因敲除文库、CRISPR/Cas9 基因激活文库、lncRNA Activation Pooled Library等。 CRISPR/Cas9 基因敲除文库: 以Lenti-CRISPR V2质粒为例。sgRNA与Cas9蛋白结合于同一个载体上,通过设计合成了12万个sgRNA,分别连接到Lenti-CRISPR V2上,然后把12万个sgRNA混合起来,形成CRISPR/Cas9 基因敲除文库。并且将此文库整合到了细胞中,一个125cm2细胞培养瓶中含有约108个细胞,每个细胞被敲除了一个基因,共约2万个基因被敲除,所以含有每个特定基因缺陷的细胞约有5000个(108/2万)。等到的细胞,亦可进行传代。 目前可应用在人的胃癌、乳腺癌、结肠癌等癌细胞系和永生化的细胞系上,靶基因数目是19,050,gRNA数目是123,411。 所以,CRISPR基因编辑技术专利为何在国际上引起如此大的轰动,争得不仅仅是专利这一纸文书,而是专利背后潜藏的CRISPR市场的这块“大蛋糕”,输赢意味着以后CRISPR的市场上的主动权将在谁手中。值得庆幸,博德研究所可以保留其CRISPR的专利权,可以说中国在CRISPR未来的市场上占据一定主动权。
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