2015年版药典微生物限度方法确认问题

freeer06

⒉接种和稀释
按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
（1） 试验组：取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
（2） 供试品对照组：取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。
（3）菌液对照组：取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。

平皿法如何做很好理解，关于薄膜过滤法方法确认有以下疑惑：
1. 薄膜过滤法进行方法确认时，允许不将菌液直接加在制备好的供试液中（红色字体），还是和2010版那样在最后一次冲洗液中加菌？
2. 菌液对照组是不是也要和试验组一样，薄膜过滤、冲洗后计数？
3. 如果没有使用中和剂和灭活剂，薄膜过滤法还需要做稀释剂对照组吗？

有没有参加过培训的同仁发表下见解。

freeer06

自己顶一下，别沉了。

syhorchid

帮顶

yuansoul

平皿法如何做很好理解，关于薄膜过滤法方法确认有以下疑惑：
1. 薄膜过滤法进行方法确认时，允许不将菌液直接加在制备好的供试液中（红色字体），还是和2010版那样在最后一次冲洗液中加菌？

因为前面说了“如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。”  那么 “和2010版那样在最后一次冲洗液中加菌” 是可以的。


2. 菌液对照组是不是也要和试验组一样，薄膜过滤、冲洗后计数？

不需要冲洗

3. 如果没有使用中和剂和灭活剂，薄膜过滤法还需要做稀释剂对照组吗？

需要做 稀释剂对照组

freeer06

自己顶一下，别沉了。

freeer06

继续顶，希望大家多多指教

freeer06

继续顶，希望大家多多指教

freeer06

有没有人了解啊，发表下意见

freeer06

yuansoul 发表于 2015-8-3 07:35
平皿法如何做很好理解，关于薄膜过滤法方法确认有以下疑惑：
1. 薄膜过滤法进行方法确认时，允许不将菌液直 ...

菌液对照组按试验组加入菌液，过滤后如果不冲洗的话，会不会存在菌落分布不均匀重叠的风险。

yuansoul

freeer06 发表于 2015-8-4 18:11
菌液对照组按试验组加入菌液，过滤后如果不冲洗的话，会不会存在菌落分布不均匀重叠的风险。

回收率 和 可数 总是矛盾的。

freeer06

yuansoul 发表于 2015-8-3 07:35
平皿法如何做很好理解，关于薄膜过滤法方法确认有以下疑惑：
1. 薄膜过滤法进行方法确认时，允许不将菌液直 ...

“菌液对照组：取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。”
比如取10ml稀释液，按试验组操作加入0.1ml菌液（含菌数不超过100cfu），菌液对照组该如何进行微生物计数？
法一：10ml接种的稀释液薄膜过滤，冲洗（冲洗次数同试验组）。如果照此法操作，稀释剂对照组还有必要做吗？
法二：10ml接种的稀释液薄膜过滤，不冲洗
法三：取1ml接种的稀释液，平皿法计数，结果乘以10

freeer06

yuansoul 发表于 2015-8-3 07:35
平皿法如何做很好理解，关于薄膜过滤法方法确认有以下疑惑：
1. 薄膜过滤法进行方法确认时，允许不将菌液直 ...

其实我觉得如果薄膜过滤法接种还和2010版一样，允许最后一次冲洗液加菌，菌液对照组就不存在薄膜过滤和冲洗问题了，直接取1ml菌液（含菌数不超过100cfu）平皿法计数。

但是15版药典实在写的模棱两可，一方面允许供试液薄膜过滤处理后再接种，一方面又要求菌液对照组按照试验组加菌液。

yuansoul

freeer06 发表于 2015-8-4 18:32
其实我觉得如果薄膜过滤法接种还和2010版一样，允许最后一次冲洗液加菌，菌液对照组就不存在薄膜过滤和冲 ...

等正式版 药典 再说吧。药典。。哎。。。很多时候 不讲科学的。

freeer06

yuansoul 发表于 2015-8-4 19:31
等正式版 药典 再说吧。药典。。哎。。。很多时候 不讲科学的。

你可是论坛准院士啊，还有难倒你的

龙溪校尉

好好学习一下

freeer06

还有没有高人回答啊？

李沉思

药典培训还没开始，省所估计也得有转型期