急求-方法开发

Desire1

开发区分苯硼酸和苯硼酸酯的方法，苯硼酸气相无响应，液相分不开（试了不同pH和色谱柱），想问下大家有什么建议

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机智鼠

在分析苯硼酸和苯硼酸酯时，确实可能遇到一些挑战。针对您的问题，我建议尝试以下方法：

1.  **衍生化法**：由于苯硼酸在气相中可能无响应，可以考虑使用化学衍生化试剂将其转化为更易于检测的化合物。例如，可以使用硅烷化试剂将苯硼酸转化为相应的三甲基硅醚，然后进行气相色谱分析。

2.  **液相色谱-质谱联用（LC-MS）**：对于液相分离困难的情况，LC-MS是一个强大的工具。通过选择合适的离子源（如电喷雾离子化ESI）和色谱柱，可以有效地分离和鉴定苯硼酸和苯硼酸酯。

3.  **核磁共振（NMR）光谱法**：如果样品量允许，NMR可以提供关于分子结构的详细信息，有助于区分苯硼酸和苯硼酸酯。

4.  **法规与指南参考**：在进行方法开发时，应遵循相关的药品注册法规和分析方法验证指南，如中国药典、美国药典或欧洲药典等，确保方法的准确性、重复性和适用性。

希望这些建议能对您有所帮助。如有进一步问题，请随时提问。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

溯10f8413b

哈哈哈，这个别人不会告诉你的吧，都可以发专利了

一块地

1. 优化液相条件，尝试不同的柱子或流动相添加剂；2. 使用衍生化反应；3. 更换检测器类型；4. 采用质谱检测；5. 离子交换或HILIC色谱；6. 超临界流体色谱；7. 样品前处理或水解方法。

gzgz

针对区分苯硼酸和苯硼酸酯的难题，结合实验条件限制（气相无响应、液相分离困难），建议从以下方向尝试：

1. 化学衍生化法
原理：利用苯硼酸与多羟基化合物（如甘露醇、葡萄糖）的特异性反应，形成环状硼酸酯衍生物，而苯硼酸酯可能无法反应或反应条件不同。

操作步骤：

将样品与过量甘露醇在弱碱性条件下（如pH 8-9）反应。

通过HPLC分析反应产物。苯硼酸因生成衍生物保留时间会显著改变，而苯硼酸酯若无反应则保留时间不变，从而实现分离。

优势：无需特殊仪器，仅需常规HPLC即可。

2. 水解反应结合色谱分析
原理：苯硼酸酯在酸性/碱性条件下水解为苯硼酸和相应醇，而苯硼酸本身稳定。

操作步骤：

将样品分为两份：一份直接分析，另一份用稀酸（如0.1 M HCl）室温处理30分钟。

比较处理前后HPLC图谱。若某一峰强度降低并出现新峰（水解产物），则原峰为苯硼酸酯。

优势：简单易行，可间接区分两种物质。

3. 离子对色谱法（IPC）优化
原理：通过添加离子对试剂增强苯硼酸的保留能力，利用其酸性差异实现分离。

推荐条件：

流动相：乙腈/水（含5 mM四丁基氢氧化铵，pH 9.0）。

色谱柱：C18柱（如Agilent Zorbax SB-C18）。

预期结果：苯硼酸因离子对作用保留时间延长，与酯类分离。

4. 质谱检测（LC-MS）
原理：苯硼酸（分子式C₆H₇BO₂）与苯硼酸酯（如C₇H₉BO₂）分子量差异为14（酯基取代羟基），可通过质谱直接区分。

操作：即使液相保留时间重叠，MS检测器可通过分子离子峰（[M+H]⁺或[M-H]⁻）差异明确区分两者。

5. 核磁共振（NMR）快速鉴别
11B NMR：苯硼酸的硼化学位移约为δ 28-30 ppm，而酯类通常向高场位移（δ 18-22 ppm）。

1H NMR：酯基的烷氧基（-OR）质子信号（如甲氧基δ 3.3-3.7 ppm）可辅助确认。

6. 薄层色谱（TLC）显色法
展开剂：乙酸乙酯/石油醚（1:3）或二氯甲烷/甲醇（9:1）。

显色剂：茚三酮或荧光素-硼酸络合显色（苯硼酸显色，酯类可能不反应）。

总结建议流程
优先尝试衍生化法（成本低、操作简单）。

若设备允许，LC-MS是最直接可靠的方法。

若无质谱，可结合水解实验+离子对色谱优化条件。

通过上述方法，可有效规避气相无响应、液相分离差的瓶颈，实现两者的明确区分。

Desire1

gzgz 发表于 2025-3-4 16:18
针对区分苯硼酸和苯硼酸酯的难题，结合实验条件限制（气相无响应、液相分离困难），建议从以下方向尝试：
...

谢谢；我的就是苯硼酸和丙二醇反应生成的苯硼酸酯，我试了不同的pH好像两个物质还是同一位置出峰

Desire1

机智鼠 发表于 2025-3-4 16:03
在分析苯硼酸和苯硼酸酯时，确实可能遇到一些挑战。针对您的问题，我建议尝试以下方法：

1.  **衍生化法** ...

谢谢 ，可以试一下

Desire1

一块地 发表于 2025-3-4 16:16
1. 优化液相条件，尝试不同的柱子或流动相添加剂；2. 使用衍生化反应；3. 更换检测器类型；4. 采用质谱检测 ...

谢谢；检测器算了，这两个物质紫外是有响应的，两个物质一个是可以离子化的，一个是中性的，为啥我试pH2,4,6好像还是一个峰.其他的可以试一下

Desire1

gzgz 发表于 2025-3-4 16:18
针对区分苯硼酸和苯硼酸酯的难题，结合实验条件限制（气相无响应、液相分离困难），建议从以下方向尝试：
...

我试了一个在酸性条件衍生，加甘露醇80度10min，感觉没反应；弱碱的话，也是要加热吗

gzgz

Desire1 发表于 2025-3-4 16:38
我试了一个在酸性条件衍生，加甘露醇80度10min，感觉没反应；弱碱的话，也是要加热吗

需要

gzgz

gzgz 发表于 2025-3-4 16:52
需要

试试60-70℃水浴加热20-30分钟

wzzz2008

有没有试过分子排阻色谱？
具体可以参考药典0514.

416301116

这两个物质的极性应该还是有差异的，在LC下应该是能分开的，有没有可能是脂类在溶剂中水解掉了，所以出的一个峰？是不是缓一缓溶剂试一试？

Desire1

wzzz2008 发表于 2025-3-5 08:09
有没有试过分子排阻色谱？
具体可以参考药典0514.

公司目前还没有这类仪器