荧光分光光度计

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各位老师，求一份荧光分光光度计的操作规程。

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鬼使神差

荧光分光光度计操作规程

一、开机前准备

检查仪器外观：确认荧光分光光度计机身无损坏，各部件连接正常，无松动迹象。电源线连接稳固，无破损、短路风险。
检查样品室：打开样品室盖子，查看内部是否清洁，有无上次测量残留的样品或其他异物。若有，需使用干净的软布轻轻擦拭干净，确保样品室无污染物，以免影响测量结果。
确认仪器工作环境：确保实验室温度在15℃ - 30℃之间，相对湿度不超过80%。仪器应放置在平稳、无震动的实验台上，周围无强磁场、电场干扰源。

二、开机操作

接通电源：打开仪器背后的电源开关，此时仪器面板上的指示灯亮起，风扇开始运转。
启动工作站：打开与仪器连接的计算机，进入荧光分光光度计的操作软件。在软件登录界面，输入正确的用户名和密码，登录到仪器控制平台。
仪器自检：在操作软件中选择“仪器自检”功能，软件将自动对仪器的各个部件进行检测，包括光源、单色器、探测器等。此过程中，操作人员需密切关注自检进度和结果信息。若自检过程中发现任何异常，如某个部件检测不通过，软件会弹出相应的错误提示窗口，此时应记录错误信息，并联系专业维修人员进行排查维修。只有在自检全部通过后，才能进行后续的测量操作。

三、样品准备

样品选择与处理：根据实验需求，选择合适的样品，并确保样品具有代表性。对于固体样品，需将其研磨成均匀的粉末状；对于液体样品，需确保其均匀、无沉淀和悬浮物。若样品浓度过高或过低，需进行适当的稀释或浓缩处理，以保证测量结果在仪器的线性响应范围内。
选择合适的比色皿：根据样品的性质和测量要求，选择合适材质的比色皿。一般情况下，石英比色皿适用于紫外光区和可见光区的测量，而玻璃比色皿仅适用于可见光区的测量。确保比色皿的光程长度与仪器的测量要求一致，且比色皿的透光性良好，无划痕、破损等缺陷。
清洗比色皿：使用去离子水或合适的溶剂将比色皿冲洗干净，然后用蒸馏水润洗3 - 5次。将洗净的比色皿倒置在干净的滤纸上，沥干水分备用。
装样：用移液器吸取适量处理好的样品溶液，缓慢注入比色皿中，装样量一般为比色皿高度的2/3 - 3/4。避免溶液溅出或产生气泡，若有气泡，可轻轻敲击比色皿使气泡排出。盖上比色皿盖子，确保盖子盖紧，防止溶液挥发或受到外界污染。

四、测量参数设置

波长范围设置：根据样品的荧光特性，在操作软件中设置合适的激发波长和发射波长范围。例如，若已知样品的最大激发波长为350nm，最大发射波长为450nm，可将激发波长范围设置为300nm - 400nm，发射波长范围设置为400nm - 500nm，以确保能够全面检测到样品的荧光信号。
扫描速度设置：根据实验对测量精度和时间的要求，选择合适的扫描速度。一般来说，扫描速度越快，测量时间越短，但可能会降低测量精度；扫描速度越慢，测量精度越高，但测量时间会相应延长。在实际操作中，可先选择一个适中的扫描速度进行初步测量，然后根据测量结果调整扫描速度。
灵敏度设置：根据样品荧光强度的强弱，设置合适的灵敏度。对于荧光强度较弱的样品，可选择较高的灵敏度；对于荧光强度较强的样品，为避免信号过载，应选择较低的灵敏度。在设置灵敏度时，需注意不要使测量信号超出仪器的检测范围。
积分时间设置：积分时间是指仪器对荧光信号进行采集和累加的时间。积分时间越长，信号的信噪比越高，但测量时间也会增加。一般情况下，可根据样品的荧光强度和测量精度要求，选择合适的积分时间，通常在0.1s - 1s之间。

五、测量操作

放入空白样品：将装有空白溶剂（如去离子水或与样品溶液相同的溶剂）的比色皿放入样品室的样品架中，确保比色皿放置正确，位置稳固。在操作软件中选择“空白测量”功能，仪器将自动测量空白样品的荧光背景信号，并进行扣除，以消除溶剂和比色皿等因素对测量结果的影响。
放入待测样品：取出空白样品比色皿，将装有待测样品的比色皿放入样品室相同位置。在操作软件中选择“样品测量”功能，仪器将按照预先设置的测量参数对样品进行荧光扫描。测量过程中，操作人员需保持样品室盖子关闭，避免外界光线干扰测量结果。同时，密切关注仪器的运行状态和测量进度，确保测量过程正常进行。
记录测量结果：测量完成后，操作软件将自动显示样品的荧光光谱图和相关测量数据，如荧光强度、峰位置等。操作人员应仔细核对测量结果，确保数据准确无误。将测量结果记录在实验记录本上，包括样品名称、测量日期、测量时间、测量参数以及荧光强度等关键信息。

六、关机操作

测量结束后：从样品室中取出比色皿，关闭样品室盖子。将比色皿中的样品溶液倒入指定的废液容器中，然后用去离子水冲洗比色皿3 - 5次，再用蒸馏水润洗干净，晾干备用。
关闭操作软件：在计算机上退出荧光分光光度计的操作软件，确保所有测量数据已保存。
关闭仪器电源：关闭仪器背后的电源开关，切断仪器的电源供应。
清理实验台面：整理实验台上的仪器和试剂，清理实验产生的废弃物，保持实验室环境整洁。

七、注意事项

避免频繁开关机：荧光分光光度计的光源（如氙灯）具有一定的使用寿命，频繁开关机可能会缩短其使用寿命。因此，在一天的实验过程中，若中间间隔时间较短（如1 - 2小时内），可不关闭仪器电源，仅关闭操作软件即可。但在实验结束后，应及时关闭仪器电源，以节约能源和延长仪器使用寿命。
防止样品污染：在样品准备和测量过程中，应严格遵守操作规程，避免样品受到污染。使用干净的移液器、比色皿等实验器具，且在操作过程中尽量避免用手直接接触比色皿的透光面。若不慎将样品溶液溅到仪器上，应立即用干净的软布擦拭干净，防止溶液腐蚀仪器部件。
定期维护保养：定期对荧光分光光度计进行维护保养，包括清洁仪器表面、检查仪器各部件的连接情况、更换光源等消耗品。定期使用标准荧光物质对仪器的波长准确性、荧光强度准确性等性能指标进行检测和校准，确保仪器始终处于良好的工作状态。
安全操作：在使用荧光分光光度计过程中，应注意安全。避免眼睛直视光源，防止强光对眼睛造成伤害。仪器工作时，若发现异常情况（如冒烟、异味、异常声响等），应立即关闭仪器电源，并联系专业人员进行处理。

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