内毒素开发

伍月1

请问一下大家做内毒素（凝胶法）开发的时候，用几个浓度开发，我有个样品，计算最小有效稀释浓度是0.5mg/ml，我做开发，用2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml做，在观察结果的时候，2mg/ml的浓度没有凝，1mg/ml、0.5mg/ml的凝了，请问一下大家，我这个开发通过了吗？

jianing4233312

你这个实验好像失败了吧.........

lilian2007177

最小有效浓度用哪个灵敏度的鲎试剂计算的；
如果跟后边试验用的鲎试剂灵敏度一样，那1mg和0.5mg的都成功了，最起码预实验是成功了，再上正式的干扰试验，1mg和0.5mg都行，自己做做看看哪个稳定，哪个更省鲎试剂成本吧。

落幕灬

是指干扰预试验还是干扰实验，如果干扰预实验就是成功摸索出浓度了，高浓度存在干扰，稀释后干扰消除，当然供阳也要成立

teska

鲎试剂的灵敏度一样么？一样的话你这个预干扰试验1mg/ml，0.5mg/ml都可以，你可以评估一下选择一个继续进行干扰试验。

伍月1

lilian2007177 发表于 2024-11-22 08:51
最小有效浓度用哪个灵敏度的鲎试剂计算的；
如果跟后边试验用的鲎试剂灵敏度一样，那1mg和0.5mg的都成功了 ...

干扰预实验，现在是摸索阶段

伍月1

teska 发表于 2024-11-22 09:07
鲎试剂的灵敏度一样么？一样的话你这个预干扰试验1mg/ml，0.5mg/ml都可以，你可以评估一下选择一个继续进行 ...

干扰预实验，我一直以为必须要最小有效稀释浓度（0.5mg/ml)才能正式干扰试验，这个1mg/ml稳定的话，还能用这个浓度正式做干扰试验吗？

伍月1

落幕灬 发表于 2024-11-22 09:05
是指干扰预试验还是干扰实验，如果干扰预实验就是成功摸索出浓度了，高浓度存在干扰，稀释后干扰消除，当然 ...

我做饭干扰预实验

冯树

药典都有方法的啊 ，按那个做就是了。

teska

伍月1 发表于 2024-11-22 09:16
干扰预实验，我一直以为必须要最小有效稀释浓度（0.5mg/ml)才能正式干扰试验，这个1mg/ml稳定的话，还能 ...

关于稀释倍数的选择，美国FDA 问答指南(行业指南：热原和内毒素测试)的建议可供企业参考：正式干扰试验时，选择第一个不干扰稀释倍数的下一个进行。例如，某产品最大稀释倍数为100,1:10时显示有干扰，1:20显示无干扰，则可以使用1:30进行正式的干扰试验。

伍月1

teska 发表于 2024-11-22 09:33
关于稀释倍数的选择，美国FDA 问答指南(行业指南：热原和内毒素测试)的建议可供企业参考：正式干扰试验时 ...

大神，最小有效稀释浓度也跟最大有效稀释倍数一样吗？选择第一个不干扰稀释的做？

伍月1

teska 发表于 2024-11-22 09:33
关于稀释倍数的选择，美国FDA 问答指南(行业指南：热原和内毒素测试)的建议可供企业参考：正式干扰试验时 ...

不好意思，没看清楚，那我这就是第一个不干扰稀释的下一个浓度吗？我，我，我，我要语无伦次了，我主要就是问，最小有效稀释浓度跟最大有效稀释倍数一样的道理吗？选第一个不产生干扰的下一个做

teska

就你做的预实验来讲，1mg/ml就是不干扰的第一个浓度，0.5mg/ml是下一个浓度并且是最小有效稀释浓度，不能再继续稀释了，你可以使用0.5mg来进行干扰试验，只是日后再使用这个浓度进行检验出现阳性结果时不能选择最小有效稀释浓度进行复测了。

teska

伍月1 发表于 2024-11-22 11:58
不好意思，没看清楚，那我这就是第一个不干扰稀释的下一个浓度吗？我，我，我，我要语无伦次了，我主要就 ...

就你做的预实验来讲，1mg/ml就是不干扰的第一个浓度，0.5mg/ml是下一个浓度并且是最小有效稀释浓度，不能再继续稀释了，你可以使用0.5mg来进行干扰试验，只是日后再使用这个浓度进行检验出现阳性结果时不能选择最小有效稀释浓度进行复测了。你可以看一下2023年版GMP指南，质量控制实验室---微生物实验室管理和检验--细菌内毒素部分的内容，讲的很明白

机智鼠

在内毒素开发（凝胶法）中，通常需要设置多个浓度以确定样品的内毒素含量。根据《中国药典》2015版第四部附录XI E“细菌内毒素检查法”的要求，至少应使用三个不同浓度进行测试，包括一个阴性对照和一个阳性对照。

在您的情况下，使用了2mg/ml、1mg/ml和0.5mg/ml三个浓度进行测试，这是符合要求的。然而，观察结果显示2mg/ml未凝集，而1mg/ml和0.5mg/ml凝集，这表明可能存在以下几种情况：

1. 样品中的内毒素含量可能低于2mg/ml但高于1mg/ml或0.5mg/ml。
2. 可能存在其他干扰因素导致高浓度下未能正确检测到内毒素。

为了更准确地评估样品的内毒素水平，建议进一步稀释样品并重复实验，或者考虑使用其他方法如动态浊度法来验证结果。同时，确保所有操作符合《中国药典》及相关指南的规定，以保证测试的准确性和可靠性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

伍月1

teska 发表于 2024-11-22 13:13
就你做的预实验来讲，1mg/ml就是不干扰的第一个浓度，0.5mg/ml是下一个浓度并且是最小有效稀释浓度，不能 ...

好嘞，好嘞，谢谢你呀