湿热灭菌生物指示剂的选择

a路漫漫其修远兮 · 发表于 2023-3-9 19:00:35

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法规要求，D121在1.5~3之间，该怎么计算找到适用的BI？

鸡你太美 · 发表于 2023-3-9 20:13:23

不用找啊，这个范围的就行了，供应商也会推荐的，比较好的指示剂measalabs

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陈小诗1 · 发表于 2023-3-9 22:16:06

请联系我，13641300480，给您专业的建议，谢谢

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猫咪特工 · 发表于 2023-3-9 22:36:56

D值1.5~3.0，很显然，楼主是依据2020版药典9207得出的依据，那么楼主应该已经进行过相应的湿热研究，有过绝大部分的基础知识，那么在此就不做赘述。个人分享一些实用的方法。

首先需要保证生物指示剂的F值（以下用Fbio替代）大于物理F值（以下用Fphy替代）

举个例子，我们常见的过度杀灭F0值按12计算，那么Fbio如何计算？假如D值为2，那么楼主需要选择10的6次方的数量就正好满足要求。因为2*6=12。

好吧，我还是担心会不能理解，我们首先解释一下D值，假如说我需要把100个微生物杀灭到剩下10个微生物需要2分钟，在此条件下D值即为2。那么我们把10的6次方杀灭到0就正好是2*6=12。

OK，这是最基础的条件，对于绝大部分（99.9%）国内企业已经够用了，楼主按照这个选择就行。

那么再看进阶，这里可能包括指南要求和监管需求，不做正确和科学与否的讨论。

首先是物理杀灭和生物杀灭的一致性，即物理杀灭效果能够实际杀灭相应的生物指示剂。如果按我们如上要求计算，很可能出现不匹配的情况。为什么这么说呢？假设FBIO= D121℃×(lgN0-lgN) = 12分钟，看上去，FPHY和FBIO的时间刚好相当，可选择该生物指示剂进行灭菌的验证。然而，在介绍无菌保证水平的时候我们知道，微生物存活是一个概率问题。在这个案例中，当FBIO为12分钟时，灭菌后的污染菌数量NFF为：
lgNF =lgN0–t/DT = 6–12/2 = 0，则 NF=1
也就是说，产品中依然有菌，生物指示剂灭菌后培养时很大概率呈阳性。
所以，根据EP的要求，在进行灭菌工艺验证时，验证时时所选择的灭菌时间（tvl），应将生物指示剂杀灭到10-1到10-3的水平，即：
D121℃×(lgN0+1)≤tvl≤D121℃×(lgN0+3)
即：2×(6+1) ≤tvl≤2×(6+3)
即：14≤tvl≤18 （分钟）
这个数据对于专业做指示剂的企业通常会直接写在报告里，将生物指示剂杀灭到10-4所需要的时间，也即生物指示剂灭菌后全部呈阴性的时间，为生物指示剂的杀灭时间, kill time，所以报告中通常会写明杀灭时间。

如果验证时，选择的杀灭时间tvl大于kill time，则无法证明FPHY和FBIO具有一致性。这时，我们可以选择减少灭菌时间（如半循环），或降低灭菌温度（这时需要知道生物指示剂在实际灭菌条件下的Z值）来进行灭菌工艺的验证，当然也可以选择合适的生物指示剂，使得该生物指示剂的survival time和kill time满足灭菌参数的要求。当然，这涉及到另一种开发当时，暂且不表。

回到楼主问题，有效的利用好kill time也能判断微生物选择是否“过于耐受”，这也很关键。有些同行在121摄氏度15min灭菌时，却选择了Fbio过大的指示剂，这也会导致灭菌验证的失败。计算方法同上，不再细说。

当然，也有监管对“10的6次方”无菌保证水平存在误解，认为必须选择10的6次方以上的菌数的指示剂，同时又认为因为微生物计数误差在50％~200％，所以必须选择2*10的6次方的菌数，这都是不符合现在灭菌理解的做法，需要和当地监管进行磨合。

以上内容可以参考欧盟药典，PDA TR01，验证指南2003详细了解，不做过多展开。

为了微生物 · 发表于 2023-3-10 07:44:41

太牛了！！！

栗子7 · 发表于 2023-3-10 08:16:49

膜拜啊................

小林77 · 发表于 2023-3-10 09:17:51

灭菌界前辈！

余默 · 发表于 2023-3-10 13:05:18

楷模

流火如夏 · 发表于 2023-3-13 10:43:35

行业翘楚，小弟望尘莫及

Steven123456717 · 发表于 2023-3-14 10:35:41

木木老师开课吧我跪着听

acian · 发表于 2023-3-14 11:01:50

帮助理解太好了

门门 · 发表于 2023-3-14 11:25:33

行业之翘楚
我辈之楷模
木木老师我可以起来了吗（跪得麻木了已经）

芳菲的梦想 · 发表于 2023-3-15 09:35:35

楼主不是一般人呀，这是搞研究的吗

代山涛 · 发表于 2023-3-15 10:05:53

你这个生物指示剂很贵啊

vincentpian · 发表于 2023-3-15 15:56:10

木木杨大神，能不能跟我讲一下生物杀灭Fbio和物理杀灭Fphy，这两者的关系，生物杀灭Fbio我知道是什么意思，物理杀灭Fphy是啥玩意？

猫咪特工 · 发表于 2023-3-15 16:42:31

就是常规的F0，通过物理方式（温度传感器）测得的

Russell-Cao · 发表于 2023-3-15 17:07:19

过度杀灭不是10的-6嘛
如果初始为10的6次方，D121=2，那F值为2X（6+6）=24

a路漫漫其修远兮 · 发表于 2023-3-16 09:54:06

过度杀灭F0=12计算时是对于D=1,N0=10^6,计算的来的。所以需要Fbio大于等于12，要不然你Fbio=7或者8.就不能从生物的角度上说明是过度杀灭。
还有就是找你这样计算，你怎么选？

danhuang258 · 发表于 2023-3-16 11:27:00

物理杀灭Fphy是对一个灭菌程序的定义，这里面涉及到等效灭菌时间的定义，就是把不同的温度的杀灭力都换算成121℃的杀灭力，举个例子：115℃1min=121℃ 0.75min，这样就能把整个灭菌周期的杀灭力累积起来。当然这也是通过物理学方法确认的，具体是否能够达到这个杀灭效果，就需要与之相等的生物指示剂进行验证，生物指示剂被完全杀灭，才能证明物理Fphy是可靠的，是通过验证的。当选择生物指示剂Fbio与Fphy相等的时候，这时候指示剂就会有概率呈阳性，所以一般选择比Fbio略小于Fphy的生物指示剂做验证。

danhuang258 · 发表于 2023-3-21 15:36:41

大佬，我的理解是：灭菌验证中，生物指示剂的D值应小于物理F值。如果选择生物指示剂F值大于物理F值的话，会导致指示剂呈阳性结果，这样验证就失败了呀。

[无菌&限度检查] 湿热灭菌生物指示剂的选择

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