微生物计数方法适用性试验

赵晓迎

计数方法适用性试验时，平皿法、薄膜过滤法，这两种方法可以随意选择吗(有无抑菌活性的样品都可以用吗)？还是有先后顺序？采用去除抗菌活性的方法后仍不能消除抑菌活性后才能采用更高稀释级吗？有没有选用方法的架构图。

xbzhang

看你的样品特性，有抑菌性的肯定使用滤膜法进行冲洗呀

赵晓迎

xbzhang 发表于 2023-2-22 08:39
看你的样品特性，有抑菌性的肯定使用滤膜法进行冲洗呀

比如，平皿法更好稀释级的回收率合格，薄膜过滤冲洗的低稀释级回收率合格。选择那种方法啊？还是都可以。

门门

赵晓迎 发表于 2023-2-22 17:07
比如，平皿法更好稀释级的回收率合格，薄膜过滤冲洗的低稀释级回收率合格。选择那种方法啊？还是都可以。

这样的话，应该是都可以。
只能说个实际情况，以前委托药检所开发过几次微生物限度检验方法，
我发现北京市药检所喜欢用平皿法，想尽一切办法地用平皿法，
稀释，分皿，各种中和剂的调配，无所不用其极地搞成功平皿法。
原因不明。

昊昊均均01

门门 发表于 2023-02-22 18:04
这样的话，应该是都可以。
只能说个实际情况，以前委托药检所开发过几次微生物限度检验方法，
我发现北京市药检所喜欢用平皿法，想尽一切办法地用平皿法，
稀释，分皿，各种中和剂的调配，无所不用其极地搞成功平皿法。
原因不明。

个人看法，平皿法做限度方法验证简单一些

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门门

昊昊均均01 发表于 2023-2-22 21:50
个人看法，平皿法做限度方法验证简单一些

给你看一个，为了消除抑菌性，下了多少心血！
取本品10g，加含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至500ml，使供试品分散均匀，制成1:50的供试液。取1:50的供试液1ml，置含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml中，即为1:500的供试液。
需氧菌总数   取1:500的供试液1ml，注皿，平行5份，合并计数，依法检查（中国药典通则1105）。
实际是要做10皿的，因为要平均（5个的和相当于最平常法的1个）。
还觉得简单吗？
这个产品薄膜过滤法1:10供试液直接滤的方法就能满足回收率0.5-2，但最普通的平皿法回收率几乎0。

而且这方法的结果计算判定，对制药界的数学水平来说，已经是相当地有难度了！
你还觉得平皿法简单吗

昊昊均均01

门门 发表于 2023-02-23 18:27
本帖最后由 门门 于 2023-2-23 18:33 编辑



给你看一个，为了消除抑菌性，下了多少心血！
取本品10g，加含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至500ml，使供试品分散均匀，制成1:50的供试液。取1:50的供试液1ml，置含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml中，即为1:500的供试液。
需氧菌总数   取1:500的供试液1ml，注皿，平行5份，合并计数，依法检查（中国药典通则1105）。
实际是要做10皿的，因为要平均（5个的和相当于最平常法的1个）。
还觉得简单吗？
这个产品薄膜过滤法1:10供试液直接滤的方法就能满足回收率0.5-2，但最普通的平皿法回收率几乎0。

而且这方法的结果计算判定，对制药界的数学水平来说，已经是相当地有难度了！
你还觉得平皿法简单吗

都不好不做。抗真菌的原料，加了中和剂并冲洗量1000ml 薄膜过滤法，黑曲霉菌回收率达不到。最后用的分皿，加中和剂冲洗量1000ml 薄膜过滤法才做成功。

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wzzz2008

高稀释级的，能保证检出限吗？
比如，含菌量本来就不高的情况下，检出的结果，与真实值差异可能会比较大？

wzzz2008

门门 发表于 2023-2-23 18:27
给你看一个，为了消除抑菌性，下了多少心血！
取本品10g，加含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无 ...

有没有一种可能，他们没有薄膜过滤器

毅-yi

1：平皿法操作简便，以后检验能省一些事，薄膜过滤法操作相对繁琐一点，但是对于抑菌性的消除以及检验计数是更好的（平皿法很多样品计数时会有干扰），如果只过国内，那就看你们样品选择，两个方法都行，哪个方便选哪个，如果要过国外，那就建议薄膜过滤法，因为每配制批的适用性能烦死人。
2.稀释级的问题，其实药检所做方法时首选的都是稀释，按照药典里规定的限度，不超过就行，比如说口服制剂做一个1：10做不合格，你下一步可以直接做1：100，但是1：10是必须要做的，中和剂的话除了药典上列出的那几类，很多产品其实不适用的，无外乎加大稀释级，加大冲洗量，是在不行就最后一步加菌总会OK。

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