蛋白纯化时关于低PH灭活病毒

L576817603

我在想低PH灭活时，病毒灭活了，目标蛋白不也被灭活了吗？

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迷之久远

这个逻辑上不太对。给皮肤消毒，人死了吗，又不需要用剧毒物来消毒。

hetaoren

目标蛋白只是个氨基酸集团，不是生物。病毒是个生物，有自己的生命活动，灭活也是灭掉他的生命活动，让他把变成一个不活动的DNA链或者rna集团。

L576817603

有没有大神能说一下具体灭活原理，我想搞清楚，查了资料没有找到。求求了

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18281539939

低pH孵放法，是一种化学病毒去除/灭活技术，常用于单克隆抗体的病毒灭活工艺。其原理是利用病毒表面抗原在低pH值的条件下，电荷会发生改变，蛋白质的空间结构也会发生不可逆的改变，从而使病毒丧失侵染细胞的能力。简单来说，低pH孵放法是破坏病毒包膜的完整性、阻断病毒与宿主受体结合的途径，使病毒无法感染宿主细胞，起到灭活病毒的作用。

    低pH孵放法虽然因其操作过程简单、病毒灭活效果好，成为重组蛋白药物纯化工艺中常用的关键步骤，但低pH环境容易使重组蛋白不稳定，产生聚体、降解等质量问题。相比较而言，由于抗体类免疫球蛋白在低pH环境普遍表现更加稳定，因此低pH孵放法主要应用在IgG类产品。另外，低pH孵放法具有方法简单、经济实惠、容易操作等特点，已被用于伪狂犬病毒、猪细小病毒、流感病毒等病毒的灭活。

    在工艺操作过程中需要注意：本方法对于无脂包膜类病毒作用微弱（仅部分非脂包膜病毒有效），但在工艺中的低pH（如pH 4）处理（有时加胃酶）能灭活几种脂包膜病毒。除此之外，病毒灭活效果可能受pH值、孵放时间和温度、胃酶含量、蛋白质浓度、溶质含量等因素影响。随着pH升高，灭活效果降低，随着温度升高，灭活效果升高，通常可以达到5~6LRV灭活效果。在pH 3.7、pH 3.8时，其灭活效果会受多因素干扰。而样品中含有一定量的精氨酸时可以改善病毒灭活效果，即使在pH 4.0的条件下也有显著的灭活效果。低pH孵放不仅可以灭活有脂包膜类病毒，还可以沉淀HCP、DNA等杂质，对纯化工艺中的杂质去除也起到重要作用。

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Maybe12345678

也不是没有可能  要做验证啊  使用既可以灭活病毒又不影响产品质量的pH条件就行了  一般蛋白适宜酸性条件  实在不能低pH灭活 那就换个方法 建议看看《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》

L576817603

Maybe12345678 发表于 2022-09-08 15:54
也不是没有可能  要做验证啊  使用既可以灭活病毒又不影响产品质量的pH条件就行了  一般蛋白适宜酸性条件  实在不能低pH灭活 那就换个方法 建议看看《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》

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Maybe12345678

L576817603 发表于 2022-9-8 22:36
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Maybe12345678

L576817603 发表于 2022-9-8 22:36
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jssben

蛋白耐受。。。？

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天下冇赖同学

低pH孵育进行病毒灭活的原理：低pH孵育是专属的病毒灭活步骤，对包膜病毒有极强的灭活作用。低pH造成病毒包膜上的蛋白结构、膜结构、衣壳结构变化，从而去除病毒的传染能力；低pH孵育步骤可以方便地置于ProteinA层析后，在低pH洗脱液的基础上，调整pH，进行0.5-2小时的孵育；pH孵育对鼠细小病毒等无包膜病毒没有明显的灭活效果。