细胞培养Tips | 悬浮细胞复苏后，活力差、生长速率慢，该如何解决？

胖达博士

细胞复苏时需离心洗去DMSO，并且刚复苏的细胞脆弱易死亡，复苏密度不能过低，推荐复苏密度1-1.5×106 cells/ml。在此条件下，一般细胞经过2-3代能恢复到正常传代速率和活率。大家还有什么其他解决方案吗？可以在评论区分享哦~

傲娇的胞胞

学习学习

勤劳的养胞人

谢谢分享

阿宝问药

要看你是什么细胞了？

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悬浮类：免疫大多数，还有就是无血清类驯化过的，
免疫类复苏统计过一些，这类复苏后减少离心（看着很脏，只要不污染，就没问题，冻存步骤不好，复苏后碎的细胞较多）冻存步骤也可优化，后面讨论。
推荐小瓶，越小越好，常用25的可以立起来，减少培养面积，BD有更小的，有些细胞库会常备的，多孔小皿也行-比瓶子差些，目的是让PH变化尽量控制稳定，完全培养基新鲜。
无血清统计少，后面可描述详细给参考，无血清成份要防止营养耗尽，勤补液我觉得可行。后面可讨论。
部分上清回输，也是这类问题常用的方法，后面可按比例做下梯度。
保险起见：冻存时也可多冻些，做下比较。冻存前细胞要是团聚厉害，冻存前，离心后，可用0.05浓度胰酶消化下，是个不错办法，推荐办法可做比较实验。有好趋势，就固定步骤。