利用还原剂及反相高效液相色谱检测奶粉中的含硫氨基酸

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三鹿“三聚氰胺”毒奶粉事件已经过去多年，当年的给我国乳业带来的空前沉重的打击，催生了奶粉检测技术的革新。但蛋白质各具特异性不同蛋白质中氨基酸组分不同，如何准确测定含奶粉中的硫氨基酸，微源检测实验室查阅文献资料，实验了一种使用二硫苏糖醇做作为还原剂后进反相高效液相色谱的检测方式。

二硫苏糖醇（DTT）外观白色固体，化学式为C4H10O2S2。是种小分子有机还原剂，还原性较强，主要应用于生物技术领域。样品前处理；准确称量样品，加人3.0mL6mol／L盐酸溶液，低温冷冻后氮气吹干，氮气状态下封口，120℃水解24小时。水解结束后取出，冷却至室温开封后用pH=9.0硼砂-硼酸缓冲液定容10mL，摇晃均匀后静置离心操作，取上清2.0mL加入适量二硫苏糖醇（DTT）等待反应结束，40℃氮气吹干，用pH=9.0硼砂-硼酸缓冲液溶解，摇晃均匀。吸取上述1.0mL样品溶液于具塞试管中衍生操作，振荡后并加入5.0mLpH=9.0硼砂-硼酸缓冲液及2.0mL氯-3，5-二硝基三氟甲苯(CNBF）溶液，封口65℃水浴0.5小时。衍生结束后取出置于室温，振荡后加入15mLpH=7.0磷酸缓冲液，振荡30s，静置10min后取少量液体过0.22um微孔滤膜。

色谱柱	C18MGII(5μm，4.6mmi.d×250mm)；
流动相	A：乙腈；B：pH5乙酸-乙酸钠缓冲液
检测波长	240nm
流速	0.32mL／min
进样量	20μL

精确称取奶粉样品0.05g5份，分别加入40mmol／L蛋氨酸、胱氨酸标准溶液25μL、50μL、75μL，三次平行，操作同上。

实验数据基线平稳无杂峰含硫氨基酸峰高明显增大，操作简单，耗时少，适用于奶粉中含硫氨基酸的定量检测。随着检测技术的不断发展，高效液相色谱法可以作为检测乳品蛋白质掺假的标准流程方法。