求问：慢病毒纯化过程样品中产生的絮状物是什么原因

姣妹崽

问题描述：
贴壁细胞包装的慢病毒，收集下来的时候就存在白色絮凝状物，比较大一块，推测是蛋白絮凝的情况。原液进行囊式过滤器澄清后的样品里仍然后少量呈丝状的东西，滤器的孔径0.5μm
超滤浓缩、柱层析纯化后的样品有时候都会有少量的类似这些纤维状的物质
该类纤维状物质完全肉眼可见，长长短短的都有，小的类似颗粒状，大的长度有5~10μm了，理论上经过过滤、层析纯化后的样品不应该存在这么大的杂质，已排除容器不干净的因素。
感觉像是什么东西析出来的样子，但是在澄清液中样品、核酸杂质、蛋白类杂质都不至于过高，又是什么东西可能析出呢？盐浓度也很低，不至于析出。
镜下观察形态如图

蒲友们有没有遇到过类似的情况，可以支支招儿的。

吴昊123

这是放大多少倍拍的？培养液里就直接有了吗？怎么看上去不像蛋白凝集的，倒有点像脱落的纤维之类的无机物啊？能收集起来吗？能收集起来的话，看看能否溶解。

月辉

我们也出现这种情况，但是在层析后出现的，可能是聚集了，收获液没注意到有。

姣妹崽

吴昊123 发表于 2021-9-10 12:26
这是放大多少倍拍的？培养液里就直接有了吗？怎么看上去不像蛋白凝集的，倒有点像脱落的纤维之类的无机物啊 ...

放大200倍的样子，不太好收集，最初也怀疑过纤维脱落，但层析后的样品也出现了，这个就很难理解了。特别像新产生的

姣妹崽

月辉 发表于 2021-9-10 13:21
我们也出现这种情况，但是在层析后出现的，可能是聚集了，收获液没注意到有。

如果是聚集，粒径测试结果应该可以看得出来，但是不同批次之间的粒径变化也不大

乐乐辰

是否能通过核酶、蛋白酶降解，排除是这两种物质的情况

FeifeiYang

收获液就出现了 应该不是病毒聚集吧

姣妹崽

FeifeiYang 发表于 2021-10-13 16:41
收获液就出现了 应该不是病毒聚集吧

应该不是，如果这种状态的病毒聚集，都肉眼可见了，粒径应该也很大了，但实际测试结果也没这么夸张

姣妹崽

乐乐辰 发表于 2021-10-13 13:55
是否能通过核酶、蛋白酶降解，排除是这两种物质的情况

慢病毒常规检测中的核酸和蛋白指标都非常低，感觉是核酸或者蛋白聚集的可能性也不大

windysky628

谢谢分享谢谢分享谢谢分享

Joerma

可能是使用的缓冲液不太合适，可能是BSA或核酸杂质的聚集，建议更换基础缓冲液试试~

姣妹崽

Joerma 发表于 2022-3-4 11:37
可能是使用的缓冲液不太合适，可能是BSA或核酸杂质的聚集，建议更换基础缓冲液试试~

原液在收集后不进行任何处理的情况下就已经有类似的絮状物出现了，应该跟缓冲盐关系不大。

故里jxz

我们也发生过，在超滤浓缩后，顶洗回收时发现有较多絮状物，当时回收液和顶洗液都去测了滴度然后合并到一起，合并后絮状物就没了，感觉像是聚集又解聚，也没有发现中控数据有不合理的地方，就搁置了，没管是啥

姣妹崽

故里jxz 发表于 2023-3-1 16:21
我们也发生过，在超滤浓缩后，顶洗回收时发现有较多絮状物，当时回收液和顶洗液都去测了滴度然后合并到一起 ...

你说后面又解聚了，感觉像是浓度高了聚集，浓度降下来解聚。但是同等浓度甚至更高浓度的其他批次，有可能也不会发生这个问题，根本原因没找到，费劲

故里jxz

姣妹崽 发表于 2023-3-1 18:57
你说后面又解聚了，感觉像是浓度高了聚集，浓度降下来解聚。但是同等浓度甚至更高浓度的其他批次，有可能 ...

当时是超滤结束，考虑过是否是因为剪切力造成的。也有可能是蛋白类聚集，因为我们做过一个腺病毒项目也发生过类似的事情，层析收获液有絮状聚集体，不过认为是杂蛋白，后面加了步0.45过滤去除，因为那个项目发生过病毒聚集，粒径结果会增加，絮状物并不会影响粒径结果

嗷嗷嗷嗷嗷嗷

我们也遇到了这种问题，找不出原因，头疼

zhuxudong20

请教楼主，找到白色絮凝状物的原因了吗？

linda

建议更换基础缓冲液试试~

姣妹崽

linda 发表于 2024-7-25 09:22
建议更换基础缓冲液试试~

同样的缓冲液，间歇性出现这样的问题