PDA：霉菌鉴别，需要考虑哪些因素？

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2020年10月底，在PDA药物微生物学会议上，针对霉菌控制这一话题，举行了“霉菌污染和补救措施”的专题研讨会。

主讲人真菌学家Ziva Abraham，在微生物学和QA方面拥有超过35年的学术、研究、临床和行业经验。

以下是Ziva有关“霉菌鉴别”问题的解答。

问：是否应在培养的第5天或第7天，对霉菌菌落进行读数？

Ziva：许多半知菌类霉菌（deuteromycotous mold），例如曲霉菌（Aspergillus）、青霉菌（Penicillium）、拟青霉菌（Paecilomyces）等，都是速生微生物。到第5天，许多这些快速生长的霉菌，可能会形成孢子并形成其他菌落，或者以“真菌垫”（fungal mat）形式覆盖整个培养皿。这两种情况都会导致假阳性结果。

最好在第3天对菌落进行计数，并在第5天进行检查。这样，第3天的读数将允许对快速生长的霉菌的菌落进行计数；而第5天的读数将允许对生长较慢的霉菌的菌落进行计数。

问：鉴别真菌的最佳方法/技术是什么？

Ziva：在鉴别系统中有一个大型且多样化的库，对于正确鉴别和减少未鉴别菌株的机会，是很关键的。

问：建立霉菌鉴别SOP时，如果要将鉴别出的污染物保存在库中，对于存储方式，您将如何建议？

Ziva：霉菌可以冷冻保存或冻干。这两种保存方法都可选用来自外部的服务。

也可以借助于液体培养基和10-15％的甘油，企业内部自行进行冷冻保存。如果选择内部冷冻保存，则必须建立程序，以定期检查培养物的纯度。

问：您之前提到过，应该通过在显微镜下观察来确认霉菌的鉴别。您是否认为即使使用基于序列的鉴别，这也是有必要的吗？

Ziva：基于序列的鉴别，当然是理想的。

显微镜技术可以确定霉菌类型及其可能的来源，这样在等待鉴别结果的同时，就可以启动调查和补救措施。

问：有时，霉菌的鉴别结果会标为“菌丝体”（mycelia sterilia）或“未鉴别”。这些结果背后的原因是什么？

Ziva：自然界中很少有“菌丝体”。对于这种结果，通常是由于实验室使用常规鉴别方法，无法使霉菌孢子化（sporulation）产生的。

使用常规方法产生霉菌“未鉴别”的结果，可归因于无孢子化（sporulation）。对于非真菌学家，如果不了解所涉及霉菌的生长要求，可能无法提供合适的营养生长培养基，以便用于孢子化的目的。

另一方面，对于表型、蛋白质型或基因型ID系统产生的霉菌“未鉴别”的结果，这暗示了一些关键因素，例如系统库上霉菌未分类、混合的培养物、或在样品准备过程中产生的实验室错误。

问：您如何将霉菌分为弱性或强性？有没有可以参考的清单？

Ziva：相对有色半知菌类真菌（deuteromycotousfungi）和子囊真菌（ascomycotous fungi），无色半知菌类真菌更弱一些。

在合子真菌（zygomycotous fungi）中，无性孢子比有性产生的合子孢子弱。

Ref.: The Moldy Nightmare: Questions and Answers, Part 2. Jan 20, 2021.Ziva Abraham. PDA.