【金佰利杯】干货！洁净区检出菌所暴露出的无菌生产工艺中的问题

天空大爆炸

   无菌药品的要求应该算在制药行业中最为严格。近些年，药品质量控制的观念也在不断发生改变，从“检验控制药品质量”到“通过生产过程控制”，继而又到“质量源于设计”理念。质量控制，特别无菌检查的可信度很低，凭无菌检查结果来判断批次是否无菌并不能确保无菌药品的质量。最终产品的无菌绝不能只参考质量检测下定论。

   药品生产过程必须严格遵守工艺流程，药品生产所需的洁净区是无菌生产的基本要求。洁净室内的微生物种类和数量是无菌药品质量控制中重要参考内容。洁净室监控参数主要有：温湿度、压差、换气次数、风速、气流流型、悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物与人员微生物等。微生物检测是洁净室检测中的尤为重要指标。

   借着【金佰利杯】这次契机，本人就从比较新颖的角度，即通过洁净区检出菌的数量和种类，所反应出来的药品无菌生产工艺中的问题。通常来说，洁净室微生物污染来源和种属概括如下：

   洁净区检出菌的鉴别在污染调查中非常有用。新版GMP要求，需对环境及不同阶段产品监控的微生物进行鉴定，并建立污染菌种库，便于对日常监测中出现异常菌株与菌种库进行比对，查找其来源，以便采取有效措施。通常，洁净区里典型的污染菌主要来自人体表面：革兰氏阳性球菌为主，其次是环境：革兰氏阳性杆菌为主，和各种水源：革兰氏阴性杆菌为主的微生物。数据表明，在所有级别的洁净区中，检出菌类别的比例大概如下：

   检出菌的鉴定在无菌保障工艺中非常重要，可以反映出许多细节。举例如下：

1、当洁净区检出菌库的类别以革兰氏阳性球菌属为主的情况下，大致符合上述比例，表明洁净室继续在正常范围内起作用，不必过分担忧。

2、 洁净区检出菌中，皮肤相关的微生物最常见，微球菌属和葡萄球菌属占50%以上，第二个最常见的属是芽孢杆菌属约占13%。虽然革兰氏阳性微生物在洁净室中普遍存在，但其实对于葡萄球菌和微球菌属，许多物种是人类身上固有的微生物。应注意调查此部分微生物的被采集者，加强培训，提高人员的无菌意识，规范人员更衣程序和洁净区行为。

3、微球菌属中藤黄微球菌检出率最高，它是药物环境监测中最常见的微生物之一。通常与人体皮肤有关，尤其是与头部，手臂和腿部有关。无菌技术的缺陷以及洁净室管理不善是藤黄微球菌污染的常见原因。

4、芽孢杆菌属中蜡状芽孢杆菌检出率最高，蜡状芽孢杆菌的孢子通常被确定为最难消毒和根除的。根据检出地点，应引起足够重视。

5、丙酸杆菌和棒状菌毋庸置疑来自于人体。但当某短时间在高级别洁净室中频繁检出如人表皮葡萄球菌属、丙酸杆菌属等来自于人体的微生物，应注意生产过程中，规范人员更衣程序和洁净区行为。或者评估所穿洁净服的过滤能力，洁净服由于反复灭菌使用，并无法保证所有重复使用的洁净服都具有相同的过滤性能。

6、革兰氏阳性杆出现在物体表面的频率更高。与 AB级洁净区相比，CD级洁净室中，革兰氏阳性杆的数量相对较高。这符合正常现象，因为物品进入低级洁净室的清洁消毒程序往往较不严格。

7、 洁净区中革兰氏阴性杆菌和真菌的检出率较低。但意味更深远。应引起特别重视。

8、 洁净区中革兰氏阴性杆菌的比例指示水源污染程度。在D级洁净室中， 革兰氏阴性杆菌占分离物的比例要大得多。这也反映了在这些地区水槽（水源）较多。若在A B洁净室中革兰氏阴性杆菌的比例较高，应引起重视。可能与洁净室湿度设置过高有关，或部分水渍未及时清理擦干，也存在制药用水过滤除菌不够彻底的可能。企业可以实行无水化管理。

9、 在检出菌的鉴别中，葡萄球菌的不同种属的鉴定可能挖掘不出太多有用的信息；但在B级洁净室中鉴别到假单胞菌样则意味着很多，务必需要扩大调查。

10、 绝大多数来自洁净区的细菌是中温好氧或兼性需氧菌。但在使用特殊气体，有时与冷冻干燥机相关联的情况下，部分细菌可在厌氧条件下生长和被发现。如痤疮丙酸杆菌可能在冻干制品中被发现，因为本菌为厌氧或兼性厌氧，是无菌灌封中令人头痛的一个微生物《2010GMP实施指南：无菌制剂》，根据经验，该微生物直到在培养基中培养12 天后才能生长到肉眼可以观察的浓度。

11、 芽孢污染是制药企业车间较为严重的污染之一，应注意每月交替更换消毒剂，使用杀孢子剂定期杀灭芽孢。

12、洁净区中真菌的检出率也很低。如果真菌的发生率较高，鉴于真菌的生长特性，反映了一些洁净室的湿度较高或者通风不良。特别每年梅雨季节时，空气湿度大，真菌可能快速生长繁殖，如果物品传递、脱包消毒程序不够完善，未经处理的外气流流入或者物品和人员可能携带微生物带入洁净区。洁净室一旦有大量真菌污染，采用紫外消毒或消毒液不易杀灭，以致无菌保障水平得到严重破坏，应当重视洁净区真菌污染。

13、无菌测试结果为阳性时，检出菌应当鉴定到种。应当回顾微生物监测数据，确认污染源自测试中所使用的物料或技术的差错，可判该测试无效，否则判该批次不符合要求，应调查生产或实验室存在问题，并深入全面地调查整个生产工艺。

   最后，洁净区检出菌所反应出的信息远不止上述内容，我们目前还只是管中窥豹。无菌保障工艺中关键的方面，是将污染数据与污染控制措施相关联。重点分析微生物趋势并采取相应措施。通过检出菌鉴别尽可能找到污染源，消除或减少污染源头的风险比依靠空气过滤或清洁程序更有意义。

everlion

谢谢楼主分享！

xqliu

学习了，谢谢提供分享。

syhorchid

谢谢分享

一世英名

谢谢分享

天空大爆炸

everlion 发表于 2020-05-30 09:37
谢谢楼主分享！

不客气。有需要的都可以加我微信manlianFC 互相交流。

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luckylala

谢谢您对金佰利杯征文及蒲公英活动的支持

遇见你12

9205 药品洁净实验室微生物监控和指导原则有微生物鉴定：建议对受控环境收集到的微生物进行适当水平的鉴定，和作者说的新版GMP要求不是一个性质啊，建议和强制要求差别很大，所以想问问

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天空大爆炸

遇见你12 发表于 2020-7-13 19:43
9205 药品洁净实验室微生物监控和指导原则有微生物鉴定：建议对受控环境收集到的微生物进行适当水平的鉴定 ...

GMP指南无菌药品：企业应尽量开展微生物鉴别的相关工作。 对检出的微生物进行鉴别， 能为环境监测计划
提供至关重要的信息。在失败的培养基灌封或无菌检査中，分离到的污染菌， 通常会与环境
监控中的分离菌密切相关，由此建立的微生物数据库能为调査提供有价值的信息。 对关键
区、 周围洁净区以及人员的监控， 应包括将微生物鉴定到属（或必要时鉴定到种） 的常规试
验。在某些情况下， 从环境趋势分析数据中能看出微生物从低级别区或非控制区往无菌间迁
移。

xuedaozhe

谢谢分享！