DEAE Sephadex A50凝胶再生的问题

阿瑞斯123 · 发表于 2019-11-27 15:48:28

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网上查到的DEAE Sephadex A50凝胶再生过程中，酸碱之间的切换都要用到纯化水对凝胶清洗冲洗，并且pH要洗到中性。能不能用高盐溶液来代替纯化水，而且pH是否一定要洗到中性。麻烦大家帮忙解答一下，谢谢！

xqliu · 发表于 2019-11-28 09:33:04

首先建议你按要求执行，如果你有新的或更好的方法，需要验证并通过审核批准后才可实施。
这份资料或许有些启发。
凝胶层析实验步骤及细节 - 百度文库 https://wenku.baidu.com/view/3e7ce35777232f60ddcca11e.html

凯恩血蹄 · 发表于 2019-12-1 14:57:18

最好问问厂家，让他们讲解下。据我所知没有必要每次再生都是酸碱、高盐溶液，这得结合你所层析的蛋白质的性质了，楼上说的验证很有指导性，建议根据厂家提供的资料结合你们的产品，自己做一套再生工艺。

阿瑞斯123 · 发表于 2019-12-2 10:21:51

凯恩血蹄发表于 2019-12-1 14:57
最好问问厂家，让他们讲解下。据我所知没有必要每次再生都是酸碱、高盐溶液，这得结合你所层析的蛋白质的性 ...

酸碱之间的切换都要用到纯化水对凝胶清洗冲洗，并且pH要洗到中性。这是为什么呢？能不能用高盐溶液来代替纯化水，而且pH是否一定要洗到中性？

凯恩血蹄 · 发表于 2019-12-5 11:30:13

首先再生和清洗是不一样的，一般层析柱变色或出现明显脂蛋白或筛板堵塞等情况需要清洗，正常使用时再生就可以。如果非要弄明白，首先酸和碱处理的物质不一样，脂蛋白等沉淀蛋白一般用碱洗效果好。如果不冲洗至中性就会发生中和反应，效果降低。弱离子交换剂的结合强度受pH影响，会影响高盐溶液的处理效果。

剑灵 · 发表于 2019-12-20 06:28:36

碱处理时，稍微提高一下碱的温度，循环半个小时抽掉，相对来说要洗得干净一点，完全用2M的盐洗并不能保证吸附的蛋白被完全洗下来。

冬天的阳小希 · 发表于 2021-5-7 14:30:51

凯恩血蹄发表于 2019-12-5 11:30
首先再生和清洗是不一样的，一般层析柱变色或出现明显脂蛋白或筛板堵塞等情况需要清洗，正常使用时再生就可 ...

请问一下DEAE Sephadex A50凝胶再生有什么控制标准吗？

凯恩血蹄 · 发表于 2021-5-9 14:59:35

冬天的阳小希发表于 2021-5-7 14:30
请问一下DEAE Sephadex A50凝胶再生有什么控制标准吗？

一般是按照厂家指导的冲洗多少柱体积，