细胞培养-成团成片统计交流

paaad

paaad 发表于 2023-12-28 10:20
医生组-细胞培养问题全方位解决讨论-细工生物
医生组-细胞培养问题全方位解决讨论-细工生物 -结合以下题 ...

自有细胞按步骤顺利解决问题完美为首要后，订购全套试剂方案用户。

paaad

自有细胞，按步骤顺利解决问题完美为首要后

paaad

气泡培养伴随细节处：
吸液按到底，很多会忽略。大部分问题可解决，
上述问题细工统计解决问题比较顺利，大部分也没有常规判断的支原体等问题。23年解决几个案例非常成功。

成瘤不稳定组参考，首发少数技术老师参考
瓶，慢养慢传代慢生长，无损胰酶，少二氧化碳，减缓生长，减缓分化，理由：来自成干成球培养，难养细胞株痛点统计规律相似特点。分出一批评测，操作更简单，给成瘤不稳定组，提供一组备份条件，从成干特点上看，优势挺大的，也给出一套备份技术储备。
提醒：这类问题如有，培养部分上述注意外，种子来源非常重要，如是长期课题，种子建议国内正规库重新订购，并把试剂耗材部分尽量于正规库一致，一组，上述瓶并减二氧化碳一组，成干厌氧培养可查减缓细胞分化（理由一组救治培养,千万别图块）
验证成功可讨论，与后面延续

您在啥高度培养细胞
中国省会城市及直辖市海拔高度排名
1.拉萨:3656米，2.西宁:2250米  3.昆明:1922米， 4.兰州:1537米  5.银川:1114米，6.贵阳:1061米  7.呼和浩特:1056米，8.乌鲁木齐:873米  9.太原:811米，10.成都:503米  11.西安:415米，12.重庆:273米  13.长春:241米，14.哈尔滨:148米  15.郑州:119米，16.南宁:79米  17.石家庄:78米，18.长沙:58米  19.北京:57米，20.沈阳:55米  21.济南:45米，22.武汉:39米  23.南京:28米，24.广州:26米  25.南昌:24米，26.合肥:20米  27.澳门:19米，28.台北:18米  29.福州:14米，30.杭州:12米  31.香港:11米，32.天津:10米  33.上海:9米，34.海口:8米
国内已有库海拔，
上海:9米
北京:57米
昆明:1922米
武汉:39米

海拔高度 海拔含氧量,细胞培养高海拔建系，建厂前期相关技术储备统计。
供参考：
0米 100%
1000米 89%
2000米 79%
3000米 69%
4000米 60%
5000米 52%
6000米 45%
7000米 39%
8000米 33%

拉萨，西宁，青海，高海拔培养细胞相关统计。问题可告知，细胞名称、问题关键点，胰酶浓度，具体消化步骤，生长情况(可参考成瘤救助，黑点，生长慢结合细胞问题）也可留言沟通具体，
该问题统计目的，高海拔培养特性，建系，工程细胞应用等，药厂，科研单位用户可长期讨论（人才储备，与各类人才对接，能长期做基础科研，我们可对接细胞库），我们没有专利，课题等要求，没时间弄这些，，只是总结统计问题后建系目的，方法可行易重复。工程应用合作也全部与纯国内公司共享结果。
高海拔培养理由，来自成瘤不稳定验证，细胞救助培养，海拔57米验证可行。

paaad

20240323  成团成片阶段总结

2018年开始重点关注成团成片，因来源难养系，上皮，SV40，胶质为主这类问题及工业生产用细胞工厂大面积培养中提升细胞培养质量等需求，深入开发了相关胰酶消化产品，开发要点是细胞膜无损，还要消化成单个细胞，（冻存复苏步骤验证产品的优势及可行性）难转染细胞通过解决成团成片提高转染效率的案例统计，能够大大提升实验预期效果，

23年以来统计了不少类器官培养，成干培养中，免疫细胞、悬浮培养，胰岛胰腺原代中成团成片中问题，说些参考建议，后期验证有效果可来信告知，目的是有效无效不以个别案例说明有效，普遍案例大多数有效才证明可行，成团成片可看成组织内形态状态（分化后维持培养后续在统计讨论），有些共性。原代组织处理，也是消化成单个容易培养（离体后开关通路，较快适应培养体系并生长）成团成片培养相对难，也可理解成2D,3D培养。我们目的很明确的是，原代建系传代培养，在工程用2D培养细胞量会很大（在更大面积培养中细胞质量一致性尤为关键）

组织-细胞
细胞-组织

难养系，上皮，SV40
人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2
人乳腺上皮细胞；MCF-10A
人肺正常上皮细胞BEAS-2B
人肝癌细胞；Hep G2 [HepG2] 上皮样
人胚肾细胞；293 [HEK-293] 上皮样
人脑星形胶质母细胞瘤；U-87 MG [U87MG；U87 MG] 上皮样

后期相关问题统计
维持培养，控制分化。分化后维持培养后续在统计讨论
离体后开关通路，培养中问题统计

paaad

噬斑工业应用案例参考： 有时候不是分离不到病毒，是细胞维持培养时间不够，特别是难分离，新的病毒，热点应用等，从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键，经五年腺病毒、溶瘤病毒，细胞种子库级别试剂，细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点，我们促贴壁起到关键作用。
案例细胞：LMH,维持培养第十天出现噬斑，用户已完成单克隆保种，有相关需求用户要深入讨论难点，建议试剂耗材，厂家型号，培养特点，目的要求，告知详情，我们们给出参考建议，有国外疫苗生产商用户的商家，我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。

paaad

20240415建系更新参考  组织-细胞要点
1：离体处理，建议手术刀并排两三个固定后，冰上最快速度处理，建议十分钟内入皿
2：不管哪种培养体系，都要有一组含血清，这个每个实验室都很熟悉，上清前几代留着，后面建系中，细胞受损后救助（冻存复苏，长期培养驯化过程中细胞状态差等救助）
3：冻存复苏：建议两指后面包裹后直接负80后，第二天液氮，有泡沫冻存盒裹在棉花外面效果更好，建议平时冻存复苏评测。较挑剔的有免疫细胞，原代等测试效果比较好，无血清方案，建议新式冻存方法评测比较。
4：建系病毒要点：高滴度。
5：技巧参考：要对细胞镜下形状熟悉，可不用分离液，流式等前期筛选，等大量培养后在做相关检测，避免细胞受损而使细胞培养不顺利问题。大大提升成功率，上述1-3是组织到细胞，4是难感染细胞痛点，要能理解上述要点，重复实验容易并可行，也是建系简单重复关键。

paaad

后期相关问题统计
维持培养：维持培养验证建系，种子库等重要实验试剂筛选推荐，细工内部应用维持培养，在高产蛋白，培养基血清试剂评测种子库，生产应用做技术评测，外泌体应用，噬斑工业应用都取得了不错的效果。
控制分化：缺氧，成干，维持培养应用后续在统计讨论
离体后开关通路（细工优化胰酶解决这个问题，胰酶经过各种胰酶敏感细胞系长期统计筛选，胰岛胰腺类细胞系），也是离体后首代培养关乎成活关键。

成瘤不稳定组参考，首发少数技术老师参考：成干验证，减血清，增长速度很有参考意义。
当单一的畸胎癌细胞种植到胚胎上时可以长成良性组织(Kleinsmith and Pierce，1964)，这提示在转化的细胞中表型改变是可逆的。
以至诱导分化经常被推荐作为肿瘤治疗的模型(SpremulliandDexter, 1984;Freshney,1985;Marks and Breslow,2007iccirillo et al.,2006; Wang et al.2008:Kangetal，2014)。
北医白凡，生物物理所-李翀老师，10-1000个细胞成瘤五六年前文献可查下，完成上述验证，一瓶25培养瓶可接种几只动物，从成本上可大大降低培养中血清成本，并在采购血清上用到最好级别试剂。

建系应用，蛋白互作用应用，生产应用，等需要细胞状态更好为目的，细工在噬斑，稳转株应用都取得了不错的效果。噬斑成功筛选十天维持培养，筛到单克隆株。稳转株应用，稳转株细工强推，超级量加药筛选，传代加药，复苏加药筛选。超量加药目的是避免假阳性，成功率大大提升，筛出目的细胞。实验室实现量产蛋白，相关冗余试剂技术开发。
优势：免无血清，不用昂贵的转染试剂，含血清细胞工厂容错率高。外泌体，蛋白生产，维持培养所想接可得，欢迎出口商加盟。

paaad

神州细胞一条生产线的设计产量可达100亿国际单位(IU)，接近全球数十厂家竞争对手产能的总和。看到这条信息发您我司产品相关技术储备介绍。重组凝血八因子

细工分析参考，该公司一梯对，对技术、试剂成本控制要求严格，十多年技术储备充足，这些也都基于无血清为主，我们下面介绍下含血清细胞缓冲能力更强，附件噬斑十日现，能说明名细胞缓冲能力更强，参与上游工艺开发，也是为提高效价产能为主。

增强型贴壁试剂
可发试用，相关技术储备较多。
要能沟通，应用细胞，目的产物能否告知，了解目的是生产型产物出口业务对接，印度为主。效价是关键技术指标，我们可配合用户做上游工艺开发，提高产能，降低成本，细胞缓冲能力更强为最要点，看您需求，您公司要有出口业务，可做回信标记，我们刚开始做出口，业务这块还不是很熟悉。请教学习。


应用案例一，该产品上游开发已成熟，随时能转化生产，
该试剂优势就是维持培养，对细胞无损，延展应用工业疫苗生产（溶瘤蛋白生产泡内产物）、外泌体维持培养、上清物分泌各类需求（脐血脐带上清分泌工程应用）。
工业案例详细参数参考：采用 LMH 细胞生产禽腺病毒疫苗，常规基本都在 107.0/0.1ml 左右，极大地限制了产能。该试剂应用后，4 型禽腺病毒病毒 TCID50 效价大于 108.5/0.1ml（，使 LMH 细胞贴壁时间大为缩短，而且细胞培养 192h 后仍保持较好细胞形态， 易于禽腺病毒病毒的复制与增殖及后续毒价测定。4 型禽腺病毒病毒 TCID50 效价大于 108.5/0.1ml，目前 1ml 全病毒培养液可配制 200 羽份疫苗，可 100%保护 SPF 鸡免受 4 型禽腺病毒强毒的攻击（未免疫组攻毒 72h 后 100%死亡）。该试验结果由不同厂家不同 专业人员多次在细胞工厂上验证完成 。
以上试剂及工艺都成熟了，想咨询下出口要求，该技术水平随时可第三方验证（无替代，国内国外），邮件联系。

应用案例二，附件中案例图片
噬斑工业应用案例参考： 有时候不是分离不到病毒，是细胞维持培养时间不够，特别是难分离，新的病毒，热点应用等，从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键，经五年腺病毒、溶瘤病毒，细胞种子库级别试剂，细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点，我们促贴壁起到关键作用。
案例细胞：LMH,维持培养第十天出现噬斑，用户已完成单克隆保种，有相关需求用户要深入讨论难点，建议试剂耗材，厂家型号，培养特点，目的要求，告知详情，我们们给出参考建议，有国外疫苗生产商用户的商家，我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。附件是十天噬斑图片参考。
涉及要点：胰酶消化，维持培养基应用、促锚着，瓶养控制PH变化等，具体问题具体分析。

应用案例三，
生产用稳转株构建痛点优势
超剂量筛选稳转株  1：高于正常计量加药   2：带药传代    3：带药复苏
工业优势： 稳转株筛选后，普通培养条件（减少成本），常规实验室（可行性高），无需添加贵重设备，目的蛋白表达14天培养（细胞维持培养状态优势），可完美完成含血清无血清各种需求。实验室高手欢迎参与，我们对接药企联合开发及应用（变现快），各种难点痛点欢迎提问。各种无血清，转染试剂全免。

应用案例四，国内溶瘤病毒研发生产基于293细胞已有四年以上平稳订单，五家以上用户。

paaad

应用案例五：科研户救助细胞较多，案例不一一列举了，珍贵细胞（复苏后细胞不锚着）其他蛋白互作用，共聚焦，原代替代胶原酶优势，成瘤不稳定组细胞系，外泌体，细胞产物类研究，生产等可发试用，如需深入开发难点痛点上游工艺，建议告知细胞名称，培养量需求，产物名称，纯化目前我们还是弱项，细胞产量，代数，维持培养优势。种子库级别试剂可行性更高，总体看降低成本。是我们最大优势。

种子库建系建库，细工统计内容较多:也欢迎国内培养基，血清厂家参与，周期长，费用高，可成功建系意义大。欢迎外贸出口商给介绍国外用户。
试剂开发相关技术储备痛点统计中：
含血清：建系保证可行性高，体系缓冲能力强，容错率高。
无血清：在含血清细胞充足现状下，开发相对容易很多。无血清细胞系问题分析有积极意义。
黑点：国内建系常见问题，细工可从不同等级培养基，血清，胰酶，冻存后复苏活率。各痛点讨论
生长慢：国内建系常见问题，团聚成片，救助成功后处理等，按细胞组织特点，系常见问题分析并给出参考建议。
成瘤不稳定救助：实验室普遍常见问题，细工给出参考方案，该统计2023年开始，预计效果要理想，优化后，一个25培养瓶接种几只动物难度应该不大，包括PDX成瘤等痛点问题。
（最后救助后，配套消化无损胰酶也很关键。具体细胞具体分析）

paaad

痛点补充说明
1：离体处理推荐步骤补充，该方案来自成团成片细胞系，原代问题统计，2010年开始。
  统计了从2005年国内湘雅胰岛胰腺原代，2010开始统计胰岛胰腺细胞系（分离成单个容易活，胰泡，组织粘连不容易增殖，传代。解决这类问题，我司配套胰酶消化产品开发来自这些问题，该类同理问题是细胞工厂大面积消化（五年工业应用），所需消化时间长，前后消化细胞要保证一致，膜受损一致（常规0.25浓度胰酶，对膜损伤导致前后细胞质量不一致）每本细胞培养书籍及权威细胞库介绍最常用一句是，细胞变形后马上终止消化，目前各种胰酶原料来源差别也很大，相关评价过几个大厂原料，我们坚持原始原料能做到，超长时间消化，充分消化成团成片，横竖消化一致并细胞膜无损，后面有兴趣老师可讨论上皮类这类问题可验证。
上皮类细胞系SV40建系培养特点、胶质类细胞系、正常组织细胞系
有时间验证益处是，原代首代培养及第一代处理关键因素。难养系常见问题。
常年统计相关推荐：很多问题案例说明首代消化不下来，组织离体处理步骤过于繁琐，时间过长，影响的细胞活性，还建议不用化学成份，机械力干扰，（淋巴细胞分离液类，流式）细胞活性会更高，加普通培养基加含血清方案，保守的说传十代不成问题，胚胎类来源，精准手法，四十几代没问题。
混杂细胞培养在一起，后面详细介绍简单易行，单克隆几十个或上百个各类目的细胞，成纤维，上皮特性。离体生长顺利培养无BUG推荐。后期补充单克隆推荐potocol.
单克隆后稳转株建系，超量加药筛选，传代加药，复苏加药，痛点全部用充足的技术储备提出参考建议及应用案例。后期补充稳转株推荐potocol.
维持培养验证种子库级别试剂优略对建系方案要点说明，统一理念，对方案实施非常关键。后期补充维持培养验证对种子库重要性。
冻存复苏重点，后期补充冻存复苏验证对建系重要性。
后期补充资料有案例问题的都可提前讨论，问题实战最能说明可行性。
我们远景是完全国内建立工程系，理想有说服力的验证方式是五家以上实验室同时验证方案可行性（欢迎各位老师同学老板参与加盟），简单易行重复验证，可通过各类培养中问题讨论，试剂，耗材，培养环境，技术储备等

paaad

噬斑工业应用案例参考： 有时候不是分离不到病毒，是细胞维持培养时间不够，特别是难分离，新的病毒，热点应用等，从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键，经五年腺病毒、溶瘤病毒，细胞种子库级别试剂，细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点，我们促贴壁起到关键作用。

案例细胞：LMH,维持培养第十天出现噬斑，用户已完成单克隆保种，有相关需求用户要深入讨论难点，建议试剂耗材，厂家型号，培养特点，目的要求，告知详情，我们们给出参考建议，有国外疫苗生产商用户的商家，我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。附件是十天噬斑图片参考。

涉及要点：胰酶消化，维持培养基应用、促锚着，瓶养控制PH变化等，具体问题具体分析。

paaad

种子库试剂-维持培养意义-噬斑基础支撑
培养基、血清、耗材、手法
维持培养天数比较实验，培养基、血清、耗材、手法
培养基
对比各种生产技术工艺中（球磨、锤磨、高速气流粉碎、针磨）。稳定性，批间差、产能应用有非常积极意义，细工通过生产中各类问题统计解决，推荐种子库级别试剂，国产体系备份用。
细胞系建系，从细胞源头开始，到整个培养体系全部国产备份。长期各种问题统计中，统计内容全部共享验证可行性。前面统计各种难养系，在后面类器官应用中已有些效果，为更好沟通重点并快速验证效果，统一理念非常重要。
血清：通过问题解决筛选,如做细胞汇合实验验证，可讨论普通血清与种子库血清差别。培养中问题统计还比较全面，难养系，原代，类器官，PDX等难点痛点都有理论支撑及案例统计说明，培养理念一致的，如找不到厂家支持，文献支持的，我们给些建议参考。
耗材：国产较多，厂家要能公布详细参数，对产品提升质量有大意义。
技术手法：难养细胞特性特点，解决问题为主，成团成片、传代后消化不下来等，要能整体看这类问题，细工统计思路，难养系，免疫类，上皮类，原代，类器官。验证思路，冻存复苏后活性比较，转染效率提升等，还是能找到些共同特点，具体问题具体分析，可讨论，细工给些参考建议。
冻存复苏：坚持传统DMSO方案，总结更优解决思路，对冻存复苏挑剔细胞可详细讨论。
同行路过建议：纯国内体系建系合作，我司负责问题统计，及解决思路方案完全共享，目的是为建系顺利及反复多家同时验证做些技术储备，人才储备，兽用疫苗应用建系可讨论沟通，含血清细胞工厂应用容易些，建系成本可控，技术可控，人才长期储备。

paaad

20240608
增强贴壁试剂更多案例补充
应用案例六，免疫细胞转染、稳转、共聚焦等实验，通过促贴壁试剂把悬浮细胞养成贴壁培养后，很多熟悉实验方法都可尝试，也熟悉更容易解决难题，（大公司转染试剂也有几家都是通过这种方式解决免疫细胞转染）THERMO-LIPO3000反转法，takara免疫细胞转染，可看下我们链接介绍，我们17年就开始建议用户用这类方法了。当时用户说没文献用的没底气，这几年应用很多，几乎成为免疫细胞主流了，要设计生产因子相关，我们推荐稳转株筛选方法。更简单，转染试剂后期生产全免了，可行性非常高。
要点提醒：去掉促贴壁试剂培养步骤，细胞还保持原先原始悬浮状态（后续实验没有影响细胞前提）

应用案例七、促贴壁试剂方案-超剂量加药筛选稳准株
1：高于正常计量加药  2：带药传代  3：带药复苏
工业生产优势： 稳转株筛选后，普通培养条件（减少成本），常规实验室（可行性高），无需添加贵重设备，目的蛋白表达14天培养（细胞维持培养状态优势），可完美完成含血清无血清各种需求。实验室高手欢迎参与，我们对接药企联合开发及应用（变现快），各种难点痛点欢迎提问。各种无血清培养基，转染试剂全免。（有国外需求用户，提成高）

paaad

搞生物医药出口外贸老师，试用装随时可测试，对标产品：明胶、粘粘蛋白、胶原酶、等任意实验比较，等国外任意牌子同类产品比较，细工技术储备比较充足，应用灵活，培养过程中细胞质量把控，基础细胞质量准株控制，灌流后产物性价比高。该技术后面在国内开始建系合作及应用问题统计，为国内工程株建系，做些铺垫。

paaad

20240625
工业案例应用一：禽类共生病毒的分离应用：腺，豆、圆环的单种纯化分离，理论方法，预实验都比较理想，更多案例应用还在技术储备中，与各位老师合作讨论难点痛点，北京实验室可参与课题讨论，就难点痛点问题，我们做些统计先，
蛋白互作用对细胞维持培养要求高用户，可把问题先讨论后，细工给些参考建议。

国内建系实验室，生长时间过长的，也可考虑单克隆或慢培养两种技术方案，难消化细胞建议从源头考虑重新构建，难点都可通过类似问题细工简单解决方案验证，例如：难消化(简易解决培养板普血清），细工方案通过提高组织活性（不纠缠在消化不下来活性不高组织或细胞上）可行性高，操作简单，可通过简单操作步骤验证，后面单克隆，稳转株，冻存复苏等，都是基于可行性稳妥后，难点痛点先行验证可行方案，在运用在建系或珍贵细胞上。

补充内容 (2024-6-25 13:33):
国内血清生产厂家，能固定原料，成本较高的厂商，工业应用我们可参与筛出工业用细胞株，建系等合作，

paaad

SIRNA转染问题，我们细工生物提供以下细工建议及国内培养体系要点参考，供您参考与讨论：

水：建议使用进口大厂专用水，以确保实验用水的高品质。
耗材：推荐选用无DNA、RNA酶指标的耗材，以减少实验中的污染风险。
示踪RNA预实验：此步骤至关重要，能有效预判实验结果，为后续实验提供有力支持。
若上述条件均能满足，我们仍建议采用细工转染试剂进行预实验，以进一步验证实验条件。同时，欢迎您告知具体的细胞名称、实验痛点及目的，以便我们提供更精准的建议。

原代建系转染参考：（示踪重要性）
示踪质粒预实验在转染试剂比例重要
理由：转染细胞成败影响因素较多，细胞增值情况，质粒质量，构建，转染步骤等。示踪后最佳比例先固定，在找其他因素（推荐病毒建系）
转染只是搬运过程，后期表达等要求，还要看实验设计目的结果，具体问题具体分析。
我司转染试剂可用PBS配，因有毒性小，用量少特点，对难转细胞，可做二次转染或选择不换液方式（48-96我司已做测试，不理想用户要提供详细操作步骤，试剂厂家，预期结果，细胞名称），预实验先行，做到心中有底，冗余理念先行，转染后救助方式可深入讨论。
建系推荐病毒主动方式（质粒被动方式），高滴度优势前面已经有介绍，主要辅助是我司促贴壁试剂及维持培养。

建系目的：顺转、稳转、病毒转后，单克隆，或者反复单克隆后，细胞纯度大大提升，单克隆灵活应用参考（细胞建系后培养），原代建系后，提升细胞增殖速度，可将几堆增殖较好的汇合培养，反复汇合，提升细胞增殖速度。
建系成功后，冻存复苏细工方案随时可做对冻存复苏挑剔细胞先行验证，拿到准确数据后，在上实验（推荐验证三年以上冻存复苏细胞验证，我司最新复苏救助备份方案，促贴壁试剂方法值得一试，复苏后一代就能看到结果（细胞舒展度，锚着，可做比较，差别非常大，该方法也适合平时培养细胞逐步提升细胞质量冗余备份方法，难养类，耐药株类，自建系类，种子库类备份推荐，维持培养其他目的可详细讨论，这里不做拓展）
建系是个重要实验，对试剂，耗材，技术手法要求高，尽量用到最好标准。

20270915
自动化转染应用中，细工冗余试剂开发产品优势-转染试剂
锚着不牢，或免疫细胞可用增强贴壁试剂辅助，反向驯化，高通量处理细胞优势明显。
悬浮通过增强贴壁试剂可驯化成贴壁培养-细工建系目的（不用增强贴壁后，细胞呈悬浮原始样）
配套细工转染毒性小实验，自动化工作流程的可重复性转染（预实验为准，5次-10次）
生产目的用户参考：规模培养后转染生产用户，可参考我们建议单克隆方法，筛出高产株后，省去很多转染步骤与经费。目前相关工业应用上游开发已在进行中，预期不错。

20240915-2
冗余试剂开发及用途介绍

大厂前研主流转染试剂，反转法（免疫，原代）对反转法细胞主流方法，都是促细胞锚着后，转染细胞。
为工业大面积培养后转染，需毒性低，冗余容错能力强（自动化转染已有10几次同时反复转染细胞）给难转细胞提供更多备份方案，之前对双抗，血清等影响，也慢慢开发出不用双抗血清影响的转染试剂为主流，我司就毒性小，难转细胞可反复同时转染多次，达到预期转染效果，给难转细胞提供更多备份方法。
另：转染后死细胞过多，我司提供种子库用级别水试剂。提供三个备份思路参考。
1：可免费申请使用（培养基）
2：血清用量建议加到原完全培养基比例150%，
3：上清回输，该步骤效果评测（特别是难养细胞系，原代细胞）回上清比例10%-50%有明显比全新完全培养基增值快，拿到这个预实验结果，在上转染后救助（很多难养系该方法明显有奇效，特别是胶质神经类，也可同时培养多出一组备份，专门给转染后死细胞救助用，案例用户在HEPG2细胞上已应用多年（hepg2细胞更多转染前优化，参考我司胰酶详细介绍）
建系目的用户，强烈建议参考我们推荐冻存复苏套装，原理。可用对冻存复苏挑剔细胞做比较预实验实验，跟稳妥。
自动化转染问题，冗余试剂开发统计中，欢迎老师赐难点痛点问题。

paaad

自动化应用配套-冗余试剂

解决实际问题，易重复，反复控制，更多非线性自动化发展冗余试剂容错调整，细胞驯化培养等，简易单克隆种子库种子高精准筛选。
目前头部公司已有，自动化培养，转染、核酸（DNA，RNA）就我司执着后面建系目的开发痛点问题统计，也开发些冗余试剂细胞培养重点，该试剂特点是来自难养中问题统计，如培养中（黑点、生长慢）常见问题中都有些小成绩，痛点问题给出参考技术储备，后面也可选择细工提供统一案例验证细胞，试剂，技术手法，还可通过问题实战解决评价，预期效果展现，比较说明可行性。

我们只做科研阶段讨论，中式涉及的问题我们也有兴趣统计，理论上我们案例细胞思路就是配套自动化目的，案例细胞容错能力来自问题统计与应用，适合二倍体工业应用自动化理论上已讨论通过，几个小品列下优势及特点，胰酶、增强贴壁试剂，转染试剂。
胰酶：对细胞膜无损，各种胰酶敏感细胞常规培养，种子库验证案例多，293每个实验室都用，我们胰酶可同时加几十盘同时处理，细胞工厂工业案例培养面积广，都可随手验证，因培养涉及因素较多，进口国产体系，预算影响等其他因素需建议意见的，我们也可提供参考建议。
增强贴壁试剂：救助冻存后复苏不活案例已开始统计，7年统计中，救助案例还比较少，预计后面这种问题可能会更多，（新品化学成分对细胞的影响，后面有可能会统计）蛋白增产，超长维持培养是这款产品特点，后面具体问题具体分析讨论，产品链接介绍了我们产品案例历程。
转染试剂：结合自动化应用，毒性小，反复转染十几次，反复控制，对难点问题有明显机器优势，难转的痛点问题大质粒，可设计几个小质粒同时反复转染，也是给这种大质粒解决问题的一个思路。
优势简述

细工优势在自动化细胞培养中，冗余试剂为重点方向，维持培养有明显优势，封闭系统减少污染，高通量易重复，常规问题能解决，痛点问题有突破。统计问题一直做，
自动化相关，DNA,RNA可来信注明您司优势，需案例细胞验证邮件注明。国内试剂研发生产，建议参与建系合作，优势是自己体系的细胞系很能说明试剂水准，细胞工厂结合含血清自动化，目前优势大。容易实现，痛点问题都可先讨论及验证。
以减少手动处理引起的变化，并在高通量分析中获得可重复的结果。高通量应用，如敲除研究或靶筛查，通常包括细胞转染。
建系中：无外力影响，含血清培养优势可行性高，无血清开发成本高，先不参与，培养中问题还是积极统计，没有问题就没有研发。血液类细胞低速离心筛选统计开始。
二倍体工业应用：纯国产体系备份，产品，技术，增强贴壁试剂统计历程，难点痛点各种问题都有涉及，各种难养系技术统计储备，可做灵活穿插及长期验证
一次性大容量转瓶为大规模细胞培养，我司促贴壁微球案例图，是静止培养后贴壁细胞，需优化可标明细节先讨论可行性。(微载体/转瓶/摇瓶/滚瓶）
封闭系统解决优势一次性技术自动化应用。
生物生产/细胞培养/细胞生长/干细胞研究/细胞生产/疫苗开发-维持培养优势
药物发现/3D细胞培养/癌症研究/基因组学/蛋白质晶体学/蛋白互作用/疫苗研发-细工结合建系，单克隆种子库，含血清细胞工厂结合自动化，高通量，封闭系统
化学/有机化学

相关应用
工业案例统计-工业
生产痛点是可扩展性、自动化、模块化类型灵活性，以及所有这些因素如何影响上市时间和生产成本
蛋白质到抗体再到核酸生产，产品成功实现生物反应器接种和大规模悬浮培养
生物分子大规模生产
冻存可以使细胞进入真正的悬浮休眠状态，最大限度减缓细胞衰老和进化，从而为生物库研究应用提供更均匀的细胞群。
病毒载体在基因和细胞治疗中的应用在各种疾病中研究，质量控制过程中对基因治疗产品进行质量和安全控制的需要，以确保其进入临床试验阶段
疫苗研发行业工作，成为动物健康领域细菌和病毒疫苗的生物工艺科学家，负责扩大规模，并与制造工厂进行技术转让。
行业痛点最关心的一些是可扩展性、自动化、模块类型灵活性，以及所有这些因素如何影响上市时间和生产成本。
单独控制细胞内的混合体积，病毒载体在基因和细胞治疗中的应用在各种疾病中研究，质量控制过程中对基因治疗产品进行质量和安全控制的需要

细工免疫细胞建系，科研
造血单核细胞（PBMC）、CD8+细胞。CD3+细胞，抗生物素药物辅助，逆转录病毒的生物素来选择CD8+细胞
分离单核细胞，低速离心方法统计开始，无外力（机械力，化学力），含血清建系，转染感染建系痛点讨论，
CD3+细胞的方案符合生物素抗淋巴瘤
大规模扩增干细胞/MSC/pbmc/MSCs/间充质干细胞的长期培养，生物素化抗体偶联物筛选
测量微升液滴溶液中纳米颗粒（NP）的尺寸和浓度
血液制品中分离和收获可编程体积的靶细胞群。可定制的过程编程、将样品自动分离到三个腔室中以及用于细胞分离的高灵敏度红外传感器可确保一致、可靠、高效、高回收率的结果。
从蛋白质到抗体再到核酸生产，利用细工生物冗余试剂工艺和细胞培养产品成功实现生物反应器接种和大规模悬浮培养或贴壁细胞工厂培养。
如衰老、癌症、传染病等。

paaad

自动化统一案例细胞欢迎参与，免费提供细胞种子，试剂，要求用户进口耗材配合，同一标准后，对问题解决准确。
如：国产进口两个体系，含血清无血清两个体系，常年培养后碰到的问题积累也不一样，解决思路办法完全不一样，就自动化，统一后，对准问题相对容易。
293，293T
培养基，血清，胰酶，DMSO,PBS
科研型：目的是国内培养体系做种子库备份，技术达标后，我们会陆续添加细胞系，都是正规库来源。例如这个细胞系相关慢病毒，腺病毒感染，建系目的，我司都可讨论高滴度扩增后应用，建系，晶体研究等。
生产型：国内培养体系备份，提供细胞，水试剂，进口耗材要求，案例细胞种子库满意后，适合二倍体生产应用。直接到中式，应用案例五年不间断生产相关统计。
自动化转染，规模培养，相关冗余试剂开发。

科研到中试，案例细胞参考，目前已有研发中，问题可讨论。
二倍体工程细胞应用科研，生产，自动化设备+冗余试剂（技术）纯国内技术生产备份。
原代细胞生产用代数限制，大大影响疫苗产量，细工增强贴壁法是及配套，增加细胞维持培养天数，产能相应提高，兽用乙脑疫苗生产提高10倍,研发到中式，可交钥匙对接，无需特殊昂贵设备添加，含血清细胞工厂。
WI- 38、MRC- 5、FRhL- 2 、2BS、KMB17、人二倍体细胞（HDCs）、BHK-21,HEK-293、walvax-2  BV2  A172(后两株是新工艺基质胶开发目的）
二倍体工程细胞应用科研，生产，自动化设备+冗余试剂（技术）纯国内技术生产备份。拓展更多应用完善及问题统计
冗余试剂开发重点：常规问题应该都要解决，包括些难点痛点也要有突破，在上自动化设备，会有超强容错能力，预计自动化软试剂与硬设备对接顺畅，规模培养延展应用，建系等都会很顺利产出高质量细胞，蛋白，蛋白下游研发企业要能共享技术资料公司，给些上游研发加持。

国外细胞培养疫苗生产用户拓展合作，细工增强贴壁试剂出口，国内有验证实验室，可发试用。

paaad

自动化样本库-冻存复苏冗余试剂统计
冗余冻存试剂开发持续模式，试剂+温度监控设备长期评测
主传统技术优化，DMSO+血清
次新品开发思路可行性：玻璃化干细胞冻存复苏应用，临床样本冻存复苏目的数据统计，

案例方向-冻存复苏挑剔痛点类细胞
原代细胞自动化培养优化讨论可行性-化学成分对细胞长期影响讨论技术数据统计（离体技术方法统计）
马立克疫苗生产应用讨论
肝细胞原代
国内建系细胞，技术部分全部共享
临床免疫细胞冻存复苏（建系目的）
可共享原代已有技术评测
高通量、自动化、标准化。大厂应用数据评测，可行性讨论，冗余试剂研发问题目的各种痛点问题统计（二倍体工程细胞应用科研，生产，自动化设备+冗余试剂（技术）纯国内技术生产备份）案例细胞统一标准验证可行性。

延展应用：生物制药，基因工程，细胞培养，细胞工程，实验动物 重组蛋白，动物保健，基因工程，样本库 生物
参与
制冷设备研发生产商-控冰检测设备基础数据统计。

paaad

推荐统计细胞，
施万 造血原代，原代免疫，原代自建，
系L5178Y HL-60 A549 MDCK ,二倍体

试剂部分
传统成分：丙三醇、二甲基纤维素（DMSO) 聚乙烯吡咯烷酮( pvp) 聚乙二醇(PEG) 羟乙基淀粉(HES)
辅助：胶原 透明质酸钠 硫辛酸 谷二肽 环二肽 甘露聚糖 氯化钠 海藻糖
培养基成分添加
重组人血清白蛋白、复合抗氧化剂、抗菌剂、缓冲液、注射用水
L-异亮氨酸、L-异亮氨 、L-亮氨酸、L-醋酸赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、、亚硫酸氢钠、

检测控冰，安瓿瓶温度探针

上述试剂，设备生产厂家路过，可给我司留言，有兴趣参与研发都没问题。有兴趣老师课题组，要有兴趣欢迎参与，

冻存复苏是国内细胞建系关键步骤，难点细胞统计意义积极。
各种冻存复苏痛点问题都可讨论。各种难养，成团成片等各种特点细胞技术储备足。北京，天津，可面谈讨论。
相关技术老师有兴趣可参与，加我微信。这次冻存复苏统计涉及的冷藏技术，工业工程类技术，较多。
有相关例在应用，我们可给些备份方案，国内种子库我司也可参与备份体系验证等，路过大牛老师如果深入研究统计过，可讨论共同验证，及灵活的合作方式。