关于阳性对照，求助

心如止水2012

    大家实验时，阳性对照金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的加菌液计数通常是多少？药典规定为不大于100cfu,因此在做产品方法验证时加菌计数通常为50-70cfu,然后有次我司产品送药检所检验，按我司提供的方法，药检所的实验结果金黄色葡萄球菌阳性对照失败（当时用TSB100ml培养），药检所老师说他们的加菌计数通常用20-30cfu,也不知道是不是大多药检所都加这个量，因为我们的产品有一定的抑菌性，我问老师能不能加大加加菌量，药检所老师说不可能。。。我觉得很郁闷。。。他说这个加菌量更能体现方法的灵敏度。。。后来，我又尝试加大TSB的量用200ml,当菌液计数有30cfu以上，阳性对照基本都可以成功，但偶然会有一份或两份阳性对照失败，因此，很苦恼。。。    这个产品为搽剂（像红花油），通常用薄膜过滤法，以前我们也用，但后来觉得很麻烦，15版药典前刚改为平皿法，15版药典要求加菌至样品中一起处理，这对我们的方法有很大影响。
　　我们的处理方法是取供试品10ml至20ml的肉豆蔻酸异丙酯中，混合后加入100ml45度以下的蛋白胨（用三角烧瓶装），混合静置，使油水分层后（油层在上，水层在下），直接用移液管
吸取下层的水层进行实验，这操作如果吸取时移液管的液体一回挤就会导致油水又容易重新混合，一旦油多，而加菌量不足就会影响阳性对照的结果，现在用分液漏斗分取好水层后进行实验 ，不知道可行与否。
　　或者大家有什么好的建议，请帮帮忙！
   

素粥一碗

你的样品处理方法好象有问题，你验证都通过了？

逝水无痕兔兔

如果有抑菌性还是用薄膜法吧

心如止水2012

素粥一碗 发表于 2017-8-14 16:40
你的样品处理方法好象有问题，你验证都通过了？

有什么好的样品处理建议？如果加菌量低就很难保证阳性的结果

高连海

薄膜过滤法吧。

心如止水2012

想逃避薄膜过滤法，因为觉得真的挺麻烦

心如止水2012

高连海 发表于 2017-8-15 07:10
薄膜过滤法吧。

你们加菌计数是多少？

看雪

找个有能力的做个检验技术开发

高连海

心如止水2012 发表于 2017-8-15 16:28
你们加菌计数是多少？

一般20-50。

cms8528

20~30cfu与30~100cfu，没有区别，不存在“加菌量少更能体现方法的灵敏度”，反之，如果加菌量过小（20~30cfu）反倒影响计数方法的准确性，平皿计数下限为usp为25cfu，chp为30cfu，当低于25cfu时，误差在0.2%以上

心如止水2012

cms8528 发表于 2017-8-16 08:46
20~30cfu与30~100cfu，没有区别，不存在“加菌量少更能体现方法的灵敏度”，反之，如果加菌量过小（20~30cf ...

学习了！不明白药检所为什么加的菌数这么少？