关于微生物限度检查供试液制备“1:10”的疑问

yangseine

RT~~~~微生物限度检查中，供试液制备方法反复提到制成1:10供试液，如“水溶性供试品：取供试品，用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7. 2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液”。那么这个1:10的供试液是怎么配制？下面两种做法：

1、目前多数做法，固体样品，取10g，加入100ml稀释液；液体样品，取10ml，加入90ml稀释液。

2、而有些人认为1:10是比例浓度，固体样品，取10g，加入100ml供试液；液体样品，是取10ml，加入100ml供试液。


从后续实验操作过程来看，都是要求取相当于1g或1ml的供试液进行操作，另外从微生物限度判断标准来看，也是以1g或1ml含有的菌落数报告，那么，无疑，液体样品的配制，取10ml，加入90ml稀释液，这种方法是对的，利于后续实验步骤的操作。同样，固体样品，也应该是配制完成后液体体积是100ml，但容量瓶不能灭菌，无法定容，同时固体样品10g体积较小，忽略体积的话，直接加入100ml稀释液也可以。


我选择第一种做法，不知道大家怎么理解的，请指点。

ansion851014

我给你普及一下吧，不娱乐了，娱乐的逼格都低了。
1、必须要定容；
2、你讲的容量瓶不能高压，确实是，但是有没有其他的方法保证无菌呢？你想不出来，那就是暴露你实验室的短板了；
3，很简单，定容完后直接滤膜过滤到滤杯（还让我跟你说滤杯买什么规格和品牌的吗？）即可。
不谢。

Doitasyoulike

还想说的是微生物限度计数并不是很严格的定量检查方法，因为微生物生长的因素太多，前面严格的定量是没有意义的，例如在计数法的最后可接受标准就解释了如果可接受标准为100，那么实际允许的计数可以达到200
我们习惯的做法通常是如果要求样品溶液配制为1:10，对于液体来说就是1体积的样品+9体积的稀释液，对于固体来说，就是1重量的样品溶解在10体积的稀释液中

不拘小杰

一般认为是
1：10=1个报告单位：10个检测体积
不知道解释的清楚否

不拘小杰

一个回收率50%-200%的检测
还谈啥定容啊

yangseine

不拘小杰 发表于 2016-1-26 14:40
一般认为是
1：10=1个报告单位：10个检测体积
不知道解释的清楚否

那你的意思也是支持第一种做法做了，是吧，取10ml就是一个报告单位，一个检测体积

fxh438520

支持第一种做法

yangseine

不拘小杰 发表于 2016-1-26 14:41
一个回收率50%-200%的检测
还谈啥定容啊

准确度是一回事，方法是另一回事啊，如果方法不对，那不笑掉大牙吗

yangseine

不拘小杰 发表于 2016-1-26 14:41
一个回收率50%-200%的检测
还谈啥定容啊

准确度是一回事，方法是另一回事啊，如果方法不对，那不笑掉大牙吗。
我就曾经看到过计算公式都不对的情况，那检测结果更不用谈准确了

不拘小杰

总之原则就是每一皿的量是 1个报告单位 0.1个报告单位 或0.01个报告单位

yangseine

不拘小杰 发表于 2016-1-26 15:25
总之原则就是每一皿的量是 1个报告单位 0.1个报告单位 或0.01个报告单位

明了，谢谢。。。。。。。。。。。

meng100523

支持第一种做法

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 12:14
我给你普及一下吧，不娱乐了，娱乐的逼格都低了。
1、必须要定容；
2、你讲的容量瓶不能高压，确实是，但 ...

妹子，你说这些我都知道，你说的是科研做法，我提到的是大众做法，有那么一点差别，另外这是做微生物限度检测，不是要除菌，把样品滤膜过滤了，我还检测啥

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 12:14
我给你普及一下吧，不娱乐了，娱乐的逼格都低了。
1、必须要定容；
2、你讲的容量瓶不能高压，确实是，但 ...

回送你一句话，别总当个半吊子，自以为什么都懂，可实际上回复的东西什么都解决不了。还指教人家怎么除菌呢？你还不如说直接高压蒸汽灭菌锅来的彻底点。
做微生物限度检查的样品，你告诉别人用滤膜过滤了？你脑子里都是浆糊吗？除了菌这供试品液还怎么检查微生物？

连实际问题都弄不明白，就根据你那点可怜而又微薄的一点基础知识就来糊弄人？醒醒

a72736650

yangseine 发表于 2016-1-26 14:53
准确度是一回事，方法是另一回事啊，如果方法不对，那不笑掉大牙吗。
我就曾经看到过计算公式都不对的情 ...

取液量当然是力求精准啦  但是说容量瓶也太那个了
微生物实验确实也没有要求精确移取 我的办法是量杯或者量筒量取定量液体然后震荡。 计量器具用消毒液浸泡处理就放在洁具间  不拿出实验室

ansion851014

yangseine 发表于 2016-2-3 14:16
回送你一句话，别总当个半吊子，自以为什么都懂，可实际上回复的东西什么都解决不了。还指教人家怎么除菌 ...

讨论技术是吧？ok，就让你更明白一点。
首先，需要做一下系统适应性比如空白对照，阴性对照，这些条件都满足的情况下可以进行供试样品的检测；
至于你的供试品的选择，如果是原液的话，我当时做的是薄膜过滤法，使用计量过的移液器的话基本可以忽略定容的步骤，毕竟移液器是走的体积，所以定容定的是体积无大碍；
如果供试品是辅料，辅料也有液体、固体、半固体还有膏状的（之前做过鱼饲料，检测的农残），前样品处理也会涉及到定容（先简单稀释一下，再超声波一小会儿准确定容，这么讲你明白吗？）；
回到刚才讲的微生物限度检测，我刚才咨询过GIBCO，他们有专门的定容的容器（可高压三种，还用我告诉你货号吗？）你可以购买；如果不买请看下面：
生物安全柜内操作，以将事先过滤好的100+ml（针对固体）备用，或者缓冲液（针对不同的物料），我用的是滤杯定容（已经很准了），定容完冲洗滤膜后培养即可。
还有如果10gNaOH定容至100ml的水中会不会因发热最后体积减少一点点，你还要自己做验证，当时我配1MOL的时候就出现过这种情况；
其实根据我做分析的经验来看，我没听说过比例浓度，是不是你自己创造的这个概念，所以2我没做过也没试验过。
你说的固体样品10g体积较小，我不敢苟同，至少我在配10%的SDS的时候，挺多一堆的，100ml倒入的话就超刻度基线了（你知道什么是刻度基线不？）
其他的一些二噁英的前处理和定容你还要不要学？

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 15:47
讨论技术是吧？ok，就让你更明白一点。
首先，需要做一下系统适应性比如空白对照，阴性对照，这些条件都 ...

这技术你就别和我论了，我这讨论的是微生物限度检查，懂？控制菌也在这范围，知道？你家检控制菌用薄膜过滤啊？去拿2015版中国药典四部1100生物检查法好好学学，再来显摆你那微薄的实验室方法。
求你了，大妹子，你真的别再多说了，你越多说，越表明你的无知，你说的和我问的不是一个话题，好吗？
你也别整那些高大上的词汇，什么二噁英，又GBICO的，和我没半毛钱关系，我也不做检测，也用不到GBICO的耗材，不是我关注的东西，你瞎扯什么？

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 15:47
讨论技术是吧？ok，就让你更明白一点。
首先，需要做一下系统适应性比如空白对照，阴性对照，这些条件都 ...

求你了，别再多说了，行不，说的越多，越透露你的无知？说的东西驴唇不对马嘴的，都是什么乱七八糟的，我说的微生物限度检查，你看过药典四部1100生物检查法不？那不叫系统适用性实验，知道不？控制菌也做微生物限度检查，知道不？你家控制菌用薄膜过滤法是吗？
另外，也别整什么二噁英、GBICO，那和我没半毛钱关系，我不做二噁英检查，也不买GBICO的耗材，你提那做什么，硬装高大上吗？

ansion851014

其实我应该一提薄膜过滤方法，基本你做过的话就有印象，对不对。你没做过，大嘴一列列就说把菌过滤走了，哈哈哈哈哈。真正谁没做过谁做过，自己心里清楚。
你说你非得让我把话说明白，太没意思了，
年轻就是有资本啊。

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 16:01
其实我应该一提薄膜过滤方法，基本你做过的话就有印象，对不对。你没做过，大嘴一列列就说把菌过滤走了，哈 ...

无知不是错，无知的同时还以为别人比你更白痴，那就是你的错了，知道不？
和主题相关的言论，处处是外行，你还当资本，佩服你

yangseine

ansion851014 发表于 2016-2-3 16:01
其实我应该一提薄膜过滤方法，基本你做过的话就有印象，对不对。你没做过，大嘴一列列就说把菌过滤走了，哈 ...

看明白了，你今天晚上还要回去把药典4部1100生物检查法有关微生物检查的1105,1106,1107还学习一遍是不？有电子版没有，要不要我发给你？

不懂的东西，默默的看，不懂别乱发言，你懂得和主题不相干的东西别提，没人关注你的过去和经历，知道不？我在用薄膜过滤法做检验的时候，你还在读初中，小朋友