15版药典微生物计数方法适用性试验（方法验证）中加菌液这个步骤如何操作？

demet

15版药典微生物限度检查计数的验证改名了，叫做计数方法适用性试验，内容也变了，其中加菌量要求：1.所加菌液的体积不得超过供试液体积的1%。2.制备好的供试液中加入试验菌液，每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。
这个操作起来要比以前复杂了一些：首先，以前直接选择一个合适浓度的菌液1ml（含50-100cfu），加到平皿里就可以了，现在要求加到供试液中，还要满足上面2个条件。我们单位供试液体积都是100ml，要按照新版药典的要求，只能是选择一个高浓度的菌液1ml（含菌量不超过10000）加到供试液。这样一来，菌液的对照计数（我们单位没东西做不了比浊法）就很不好做，就算1ml菌液中有5000个菌落吧，这1ml菌液平均分成10份注皿，每个平皿要长出500个，不宜计数啊。
想想这事儿就有点麻烦，还是我想复杂了，大家有什么好的解决方案啊。

LKM

我们是按经验先配制好10000cfu/ml的菌液；再取1：10的供试液9.9ml，加入0.1ml菌液，这样就制成了1ML供试液中含大约100cfu了。再加入培养基中培养进行计数。

一朵玫瑰花

4．2、菌液制备：接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，。。。。30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为小于100 cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。
这是药典上1105下菌液制备，表述有点问题，已经是新鲜培养物了，为什么还要在胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养，菌种在胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养后才叫新鲜培养物吧！

freeer06

可以取0.1ml计数啊

haohao990128

可以取10ml供试液，加入0.1ml菌液（含菌少于1000），

永得利

你的第二个条件是不是理解错了，药典：接种不大于100cfu的试验菌，但没说明加入的体积一定是1ml。

huangjh

药典是规定了加菌液的体积不超过供试液体积的1%，不知道为什么

huangjh

可以取10ml供试液加菌，我们是这样做的

xiao-yan-zzy

那我们公司的供试液总共是100ml，我加了1ml的菌液，然后菌液对照组我又稀释了两个梯度，再做对照的，不知道这样行不行？

女王

LKM 发表于 2015-11-3 14:32
我们是按经验先配制好10000cfu/ml的菌液；再取1：10的供试液9.9ml，加入0.1ml菌液，这样就制成了1ML供试液 ...

你好，我也是做微生物的，可以加你扣扣咨询问题吗？

shdkzhe

女王 发表于 2015-11-5 11:29
你好，我也是做微生物的，可以加你扣扣咨询问题吗？

你好，我也是做微生物的，能加你qq吗，我的894422106

shdkzhe

LKM 发表于 2015-11-3 14:32
我们是按经验先配制好10000cfu/ml的菌液；再取1：10的供试液9.9ml，加入0.1ml菌液，这样就制成了1ML供试液 ...

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long0124

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