如何确定加菌量在50-100cfu的稀释级别

cgycxd

药典规定，在验证培养基适用性时需加入菌在50-100cfu，那么如何确认其稀释级别的问题？
一般情况是，对于新鲜培养物，做不同级别的稀释度，每个稀释度各加1ml于2个平皿，经过规定的温度时间培养后计数。那么问题来了，培养计数，培养时间是48h或者72h。此时，菌液即使在2-8℃保存，至少也是48h。而药典规定2-8℃保存时间不得过24h，常温在2h。
针对这个问题通常情况，各企业是如何做的，希望经验人士给予指导！

东岳红旗飘

按照药典规定时间，基本在此范围内。（假定培养一定时间后，菌液浓度基本达到一个相对固定的饱合浓度；不知这样理解对否？另外离开液体环境，在固定时间内的培养计数，也不能象理化指标一样准确，只是个相对可信值？）

cgc717

好像有种标准浊度管来指示菌液浓度的

微生物不太懂，

无为

让有经验的微生物QC来做

红茶.

取一定体积的样品置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。

咕咕

1、加菌前，须检测所加的菌液浓度。
2、菌液在冰箱保存和进行培养那是两回事。

先亮

用新鲜培养的菌做几个稀释度菌液，使用细菌计数器计数计算菌液浓度，使用合适浓度的菌液做实验，并将此菌液平板计数，确认当时选择是否正确。不正确重新实验。

samba6

中检院有卖标准比浊管的，说明书上有相关菌种浓度，实验时可按此标准调整菌浓度来满足要求。

先亮

比浊管、细菌计数板都可以用来提前确认菌浓度，最终还要平板计数以证明菌浓度在范围内，以确认实验可靠。

demet

培养基适用性验证和菌落计数同时进行，再看计数的结果是否符合要求。

hlm73

遇到同样的问题，急切需要知道！

cgycxd

红茶. 发表于 2015-3-4 08:57
取一定体积的样品置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。

有点复杂。你这样做过吗

cgycxd

咕咕 发表于 2015-3-4 09:03
1、加菌前，须检测所加的菌液浓度。
2、菌液在冰箱保存和进行培养那是两回事。

是的。你也亲自操作过吧？

cgycxd

先亮 发表于 2015-3-4 09:10
用新鲜培养的菌做几个稀释度菌液，使用细菌计数器计数计算菌液浓度，使用合适浓度的菌液做实验，并将此菌液 ...

是否实际操作过？

红茶.

cgycxd 发表于 2015-3-4 16:09
有点复杂。你这样做过吗

这玩意主要是要备材料，复杂倒真不算复杂，怎么都拼不过定量稀释法。比用麦氏比浊管心里有底点，看颜色这些东西，不同人的差异不小。

lxiaof

现在按药典标准操作的话，阳性对照实验的同时，也需进行菌悬液稀释平板计数，加入阳性对照中菌液相同体积，需菌落生长在50-100cfu内。相当于同步验证。
其余的方法均不能满足在24h内完成实验的要求。
没有用过比浊法进行微生物限度检查，50-100cfu的菌悬液浊度也很小，不好判断合格范围。药检所也不推荐用浊度法。

weijie26273

用血球计数板进行使用前菌液计数，准确率很高

普子

其实这个稀释级别基本是稳定的，假如这次是10-6是50-100cfu.那么以后同法方操作，基本也就是10-6，可以凭借一定的经验。

cgycxd

按照药典操作方法基本做了一遍。
1、从菌种冻干安焙管接种到液体培养基，基本上培养18h即可（除黑曲霉接种到改良马丁琼脂培养基斜面，培养5天）。
2、逐步稀释至相应级别，金黄、大肠稀释至10-7；枯草稀释至10-4；黑曲霉稀释度为10-5；白色念珠菌稀释度为10-6；1ml菌液含菌量50-100cfu。
3、分别浇注对照培养基和试验用培养基。
4、计数，计算回收率。
5、试验用培养基的菌落数比对照用的菌落数略多些。

lyfeiye

其实按照经验，在每次传代制备的菌液，按照梯度稀释，每个梯度都做平板计数，选择合适的梯度，下次在做的话就直接做相对应的稀释级别就可以