有用0.25鲎试剂检测注射用水的吗

〆呼噜娃ミミ

如果使用0.25鲎试剂，供试品阳性只能原样去稀释4λ，这样做是可行的吗

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你是注射水检测细菌内毒素阳了吗？

ldt2008

结论：不可行，建议严格参照《中国药典》2025年版、内毒素检查法章节，结合供试品特性进行干扰试验，避免仅凭经验设定稀释倍数。
一、《中国药典》2025 年版要求：

• 供试品阳性对照的内毒素浓度应为 2λ（即 0.5EU/ml，0.25×2），而非 4λ。
• 稀释倍数需根据供试品的内毒素限值（L）和浓度（C）计算，公式为：
  供试品溶液浓度 C = L × M / K（其中 M 为每公斤体重给药量，K 为系数，静脉给药 K=5EU/kg）。
• 若供试品溶液存在干扰（如抑制或增强作用），需通过干扰试验确定最小无干扰稀释倍数（MVD），而非直接固定稀释倍数。
  

二、供试品阳性对照的正确制备流程
1. 步骤 1：计算供试品溶液浓度 C

• 示例：某注射用药物，规格为 10mg/ml，给药剂量为 10mg/kg，静脉给药（K=5EU/kg），则：
  L = K/M = 5EU/kg ÷ (10mg/kg ÷ 10mg/ml) = 5EU/ml，即供试品溶液浓度 C=5EU/ml。
  

2. 步骤 2：制备供试品溶液

• 按 C=5EU/ml 配制供试品溶液（如 10mg/ml 药物原液即为 C 溶液）。
  

3. 步骤 3：干扰试验确定 MVD

• 对 C 溶液进行系列稀释（如 1 倍、2 倍、4 倍、8 倍），分别进行干扰试验（加入 2λ 内毒素），观察是否对鲎试剂反应产生干扰。
• 若 C/4（1.25EU/ml）无干扰，则 MVD=4，此时供试品阳性对照应在 C/4 溶液中加入内毒素至 2λ=0.5EU/ml，最终浓度为 1.25+0.5=1.75EU/ml，稀释倍数为 4 是基于 MVD，而非直接稀释 4λ。
  

4. 步骤 4：制备供试品阳性对照

• 在 MVD 稀释后的供试品溶液中，加入内毒素标准溶液，使最终浓度为 2λ，混匀后按鲎试剂检测规程孵育，观察是否凝胶（阳性结果）。
  

三、常见误区与风险提示

• 误区 1：固定稀释倍数代替干扰试验
  
  • 风险：若供试品存在增强作用（如高浓度电解质），未稀释足够倍数会导致假阳性；若存在抑制作用，未稀释则导致假阴性。
  • 规范：必须通过干扰试验确定 MVD，不可凭经验固定稀释 4 倍。
    
• 误区 2：混淆 “内毒素浓度” 与 “稀释倍数”
  
  • 正确表述：供试品阳性对照的内毒素浓度应为 2λ，稀释倍数由 MVD 决定，两者不可混淆。例如：
    
    • λ=0.25EU/ml 时，2λ=0.5EU/ml（目标内毒素浓度）；
    • 若 MVD=4，则供试品溶液需稀释 4 倍后，再加入 0.5EU/ml 内毒素。
      
• 风险后果
  
  • 若未按规范制备供试品阳性对照，可能导致：
    
    • 检测系统有效性无法验证，结果被判定为无效；
    • 内毒素超标产品漏检（假阴性），或合格产品误判（假阳性），存在质量安全隐患。
      

四、总结：“稀释 4λ” 的正确应用前提

• 不可行场景：无干扰试验支持，直接将供试品阳性对照稀释 4λ（即目标浓度 1.0EU/ml），不符合药典要求。
• 可行场景：
  
  • 通过干扰试验确定 MVD=4，供试品溶液需稀释 4 倍以消除干扰；
  • 在稀释后的供试品溶液中加入内毒素至 2λ（0.5EU/ml），而非 4λ。
    
• 核心原则：供试品阳性对照的内毒素浓度必须为 2λ，稀释倍数需基于干扰试验确定，确保检测结果的准确性和规范性。
  

哈里巴人

原样去稀释4λ，那阳性对照里样品浓度就减半了哦

虽然我也不知道对不对，如果用0.25鲎试剂去测的话，配置样品阳性对照的时候，应该一开始就用原样去稀释高倍的对照来保证阳性对照中的样品浓度与样品尽可能一致

所以还是用0.125的吧，省心

wgh0611

浓缩1-2倍也可以试试。