有奖回帖：用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度的疑问

大呆子

蒲友提问：


       老师们请教一个问题：用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度时，标曲是好的，样品测出来大很多，可能是什么原因，谢谢大家

梦幻咖啡

我们考马斯亮蓝法测蛋白质还是很正常的。前期主要是标曲不合格，后期测试很正常。

18253135479

做个样+标的试试，做个回收率，有没有干扰

Lily_VIP

使用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度时，如果标准曲线正常，但样品的测量值远大于预期，可能有以下几个原因：
1. 样品浓度过高：如果样品中的蛋白质浓度过高，可能会超出考马斯亮蓝染色反应的线性范围。这种情况下，建议将样品进行适当稀释后再进行测定。
2. 样品污染或含有干扰物质：样品中可能存在其他非蛋白质成分，如核酸、多糖、脂质或其他有机物，这些物质可能与考马斯亮蓝发生非特异性结合，导致测量结果偏高。确保样品纯度和避免污染是关键。
3. 操作误差：在实验操作过程中，如加样量不准确、反应时间控制不当、洗涤步骤不彻底等，都可能导致测量结果异常。仔细检查实验步骤，确保每一步操作都严格按照实验规程执行。
4. 仪器问题：使用的分光光度计或酶标仪可能存在校准问题，导致读数不准确。定期对仪器进行校准和维护是非常必要的。
5. 染料本身的问题：考马斯亮蓝染料的质量或新鲜程度也可能影响实验结果。确保使用高质量的试剂，并在有效期内使用。
6. 样品制备过程：样品在制备过程中可能发生了蛋白质的聚集或解聚，这也会影响最终的测量结果。确保样品处理条件的一致性和适宜性。
解决上述问题的方法包括：重新制备样品并进行适当稀释、优化实验条件、检查和校正仪器、使用高质量的试剂等。同时，重复实验以确认结果的可靠性也是一个好习惯。

依然星期三

操作和稀释步骤没问题，是不是存在干扰，其他成分与考马斯亮蓝的非特异性结合

唐stt07fat

不懂实验，但不影响我磳金币

暖暖太阳风

梦幻咖啡 发表于 2024-7-4 07:04
我们考马斯亮蓝法测蛋白质还是很正常的。前期主要是标曲不合格，后期测试很正常。

请问 标曲不合格是怎样解决的？

零存库古一刻

先看看是不是浓度过高，先稀释测试。

zhjf

不懂实验，但想磳个金币

13712754309

只为了币\(^o^)/~

曼殊

你们正式检测样本没有做浓度梯度稀释吗  感觉你这是样本浓度超过标曲检测限了

18838948532

这个方法用来测不含蛋白的物质合适吗