低浓度响应值和高浓度响应值差异

yy19870619

各位老师好，请问大家遇到过这种现象么：

问题一：

（1）使用水：0.2%磷酸乙腈混合做稀释剂，配制样品浓度分别为0.1mg/ml和0.4ug/ml溶液，该方法检测结果正常；

（2）使用水先溶解API，再加0.2%乙腈水定容，配制样品浓度为0.1mg/ml溶液，该条件下响应值与（1）相同；

（3）使用水溶解API，配制样品浓度为0.1mg/ml溶液，该条件下响应值与（1）相同；

（4）使用水溶解API，配制样品浓度为0.1mg/ml溶液，再将该溶液稀释制成0.5ug/ml溶液；量取0.5ug/ml溶液8ml，置10ml量瓶，用0.2%磷酸乙腈定容，配制成0.4ug/ml溶液，该条件下响应值与（1）同等浓度相比响应值偏低；

上述现象是什么原因造成的呢？

问题二：

（1）使用水做稀释剂，稀释API浓度至0.025ug/ml和0.5ug/ml溶液，再量取上述溶液8ml，置10ml量瓶，用0.2%磷酸乙腈定容，制成0.02ug/ml和0.4ug/ml溶液；

（2）上述0.025ug/ml和0.5ug/ml溶液转移至离心管、顶空瓶、玻璃蓝盖瓶（流动相瓶类似，只是体积为100ml），再量取上述溶液8ml，置10ml量瓶，用0.2%磷酸乙腈定容，制成0.02ug/ml和0.4ug/ml溶液，该溶液与0h，发现在量瓶中稳定性较好，而在其他材质中稳定性较差，半个小时后峰面积几乎减半；

这种现象原因是什么呢？

希望各位老师帮忙分析一下，谢谢

sunguoqing

问题一
4）这种配法，0.2%磷酸乙腈的浓度稀释了5倍，在活性成分0.1mg/ml高浓度下，溶剂的变化可能不影响响应值，但在0.4ug/ml低浓度下，溶剂变了会影响。
你可以用0.4ug/ml的浓度，分别测试一下2）、3），看响应值是否与1）一致

sunguoqing

问题二：
你只转移至离心管、顶空瓶、玻璃蓝盖瓶了，没见你转移到量瓶里啊?

yy19870619

sunguoqing 发表于 2023-11-17 15:46
问题二：
你只转移至离心管、顶空瓶、玻璃蓝盖瓶了，没见你转移到量瓶里啊?

这个地方我漏写了，和离心管、顶空瓶等同步操作的

yy19870619

sunguoqing 发表于 2023-11-17 15:42
问题一
4）这种配法，0.2%磷酸乙腈的浓度稀释了5倍，在活性成分0.1mg/ml高浓度下，溶剂的变化可能不影响响 ...

这个 水溶液样品我先前测过，在低浓度条件下，这个水溶液结果忽高忽低，最小浓度的即0.02ug/ml溶液测出图谱峰型分叉了，所以这次就没有进样

yy19870619

老师这个是用水溶液配制的样品线性和色谱图，在水溶液中低浓度效果不好之后才想着在水里面加乙腈看看的，用混合溶液配制所有结果都很好，分步配制后结果就不好了，下图就是测定结果