液相峰拖尾

何叙

试了几个浓度主峰都拖尾，该怎样改善一下峰拖尾问题

红豆杉南国

给的条件太有限，初步猜测流动相有问题,或者柱子出问题

赵良利兰博泰瑞

第二种情况，主峰拖尾。

1.  同样需要检查样品是否过载

样品过载通常会引起峰形变差，如果峰很高甚至超过2000mAU，且峰前后拖尾，通常认为有过载现象。但这一点并不绝对，因为不同化合物吸收强度和仪器型号不尽相同，所以样品是否过载要结合峰形，进样浓度，进样体积以及仪器型号一起判断。

2. 在流动相中加酸

在流动相中加酸调节PH小于2.5有利于改善分子结构中含有羧基的化合物的峰形。因为酸性环境能够抑制硅羟基和有机酸的离子化。

3. 添加缓冲盐或者增大其浓度

缓冲盐能够增大流动相中的离子强度，干扰离子的存在有利于削弱样品分子与硅羟基之间的接触机会，从而削弱其相互作用，进而改善峰形。

4. 在流动相中加入三乙胺

流动相中加入三乙胺有利于改善碱性化合物的峰形。因为在平衡色谱柱的过程中，三乙胺能够优先与色谱柱中的硅羟基结合，从而占据有利地形，使碱性样品分子“无从得手”“错失良机”。三乙胺就这样C位出道，傲视群雄，得意洋洋的改善了峰形。

我总会想象三乙胺抱着硅羟基，带着胜利的微笑看着碱性分子失落走开的样子。哈哈哈。

通常情况下，加入2%的三乙胺就会有显著的效果，有时候可能需要适当增大用量。需要注意的是：

a三乙胺碱性很强，注意不要超出色谱柱的耐受范围；同时加入三乙胺有可能会导致出峰时间的变化，通常在加入三乙胺之后需要回调PH值，即便如此，保留时间依然可能发生变化；b此外，三乙胺在210nm处有较强的吸收，如检测方法的波长是在此波长附近，需谨慎考虑使用，否则可能因本底升高引发灵敏度严重降低的现象；

c当然，如果液相后边还连接有质谱的话，不建议使用三乙胺以及他的好兄弟三氟乙酸，这两个家伙会抑制离子化同时不容易清除，污染质谱系统，降低其他离子对的灵敏度。

来自安卓APP客户端

郭啊盼

新的色谱柱，考虑是不是稀释样品错误，或者进样量大。老柱子那就是该换柱子了。

lootion12

测柱效     

何叙

红豆杉南国 发表于 2023-2-15 22:11
给的条件太有限，初步猜测流动相有问题,或者柱子出问题

流动相是按照药典的规定来的，但是出峰时间很晚，不知道是什么原因

何叙

赵良利兰博泰瑞 发表于 2023-2-15 22:23
第二种情况，主峰拖尾。

1.  同样需要检查样品是否过载

感谢回复！
应该不是样品过载，浓度最大的峰高也只有19左右
pH小于2.5的话，会破坏待测物质的结构，容易水解
想请问一下缓冲盐浓度增大的话出峰时间延长吗，这个出峰时间也不是很早，也不知道该怎么改善
正好检测波长就是在210nm处，还可以在流动相中加入什么可以改善峰形吗

何叙

郭啊盼 发表于 2023-2-16 07:46
新的色谱柱，考虑是不是稀释样品错误，或者进样量大。老柱子那就是该换柱子了。

确实是老柱子了，还在试方法阶段，稀释倍数应该也正常，峰面积还可以，谢谢啦

何叙

红豆杉南国 发表于 2023-2-15 22:11
给的条件太有限，初步猜测流动相有问题,或者柱子出问题

谢谢啦，我在看看之后的操作

何叙

lootion12 发表于 2023-2-16 09:45
测柱效

谢谢回复，想问一下柱效应该怎样测呢

余默

赵良利兰博泰瑞 发表于 2023-02-15 22:23
第二种情况，主峰拖尾。

1.  同样需要检查样品是否过载

样品过载通常会引起峰形变差，如果峰很高甚至超过2000mAU，且峰前后拖尾，通常认为有过载现象。但这一点并不绝对，因为不同化合物吸收强度和仪器型号不尽相同，所以样品是否过载要结合峰形，进样浓度，进样体积以及仪器型号一起判断。

2. 在流动相中加酸

在流动相中加酸调节PH小于2.5有利于改善分子结构中含有羧基的化合物的峰形。因为酸性环境能够抑制硅羟基和有机酸的离子化。

3. 添加缓冲盐或者增大其浓度

缓冲盐能够增大流动相中的离子强度，干扰离子的存在有利于削弱样品分子与硅羟基之间的接触机会，从而削弱其相互作用，进而改善峰形。

4. 在流动相中加入三乙胺

流动相中加入三乙胺有利于改善碱性化合物的峰形。因为在平衡色谱柱的过程中，三乙胺能够优先与色谱柱中的硅羟基结合，从而占据有利地形，使碱性样品分子“无从得手”“错失良机”。三乙胺就这样C位出道，傲视群雄，得意洋洋的改善了峰形。

我总会想象三乙胺抱着硅羟基，带着胜利的微笑看着碱性分子失落走开的样子。哈哈哈。

通常情况下，加入2%的三乙胺就会有显著的效果，有时候可能需要适当增大用量。需要注意的是：

a三乙胺碱性很强，注意不要超出色谱柱的耐受范围；同时加入三乙胺有可能会导致出峰时间的变化，通常在加入三乙胺之后需要回调PH值，即便如此，保留时间依然可能发生变化；b此外，三乙胺在210nm处有较强的吸收，如检测方法的波长是在此波长附近，需谨慎考虑使用，否则可能因本底升高引发灵敏度严重降低的现象；

c当然，如果液相后边还连接有质谱的话，不建议使用三乙胺以及他的好兄弟三氟乙酸，这两个家伙会抑制离子化同时不容易清除，污染质谱系统，降低其他离子对的灵敏度。

学习了学习了

来自安卓APP客户端

小小大星球

看看是否溶剂效应问题，你的样品用流动相稀释后再进样试试吧。

红豆杉南国

何叙 发表于 2023-2-16 19:23
流动相是按照药典的规定来的，但是出峰时间很晚，不知道是什么原因

色谱峰拖峰的情况通常是以下三种情况引起
1、样品量过载————但是你试了不同浓度，且下面提到很小峰也是这种情况，那么首先排除这个问题
2、流动相选择不合适————你提到是药典的方法，所以概率也是小（当然也要注意一下，试剂若使用到盐有不同形式的结晶水，试剂需要核对确认一下没有问题）。
3、色谱柱——下面提到用的是老的色谱柱，且从描述来看，你应该是初次做这个方法，所以建议你先换柱子试一试，然后关注各峰的变化情况

整体思路，先从大方向排查，确定大方向后，再往一个方向深入调查。

何叙

小小大星球 发表于 2023-2-16 22:40
看看是否溶剂效应问题，你的样品用流动相稀释后再进样试试吧。

是用流动相作的稀释剂

何叙

红豆杉南国 发表于 2023-2-17 09:01
色谱峰拖峰的情况通常是以下三种情况引起
1、样品量过载————但是你试了不同浓度，且下面提到很小峰 ...

好的谢谢
我再检查一下试剂，不同形式的结晶水对试剂有什么影响吗
现在换了一根色谱柱，看看出峰情况

有个性的乡巴佬

赵良利兰博泰瑞 发表于 2023-2-15 22:23
第二种情况，主峰拖尾。

1.  同样需要检查样品是否过载

这一看就是大学好好上分析化学的课的

wjsd604

进样量5μl试试，我跑盐酸黄柏碱就是5μl就不拖了

来自安卓APP客户端

红豆杉南国

何叙 发表于 2023-2-17 09:32
好的谢谢
我再检查一下试剂，不同形式的结晶水对试剂有什么影响吗
现在换了一根色谱柱，看看出峰情况

如果不同结晶水，需要将水折算，否则流动相的盐浓度就变了，pH值也可能也变化，出峰都会受到影响

小小大星球

何叙 发表于 2023-2-17 09:28
是用流动相作的稀释剂

那你看看你的有没有小粒径的色谱柱或者不同类型的色谱柱？这些选择不正确都有可能引起拖尾。

红豆杉南国

何叙 发表于 2023-2-17 09:32
好的谢谢
我再检查一下试剂，不同形式的结晶水对试剂有什么影响吗
现在换了一根色谱柱，看看出峰情况

最后的原因是什么，可以分享一下？