无菌检查薄膜过滤法的新手总结

微信vivxorrc · 发表于 2022-10-31 14:49:36

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本帖最后由微信vivxorrc 于 2022-10-31 15:17 编辑

从要开始做无菌产品，就查了很多资料，发帖咨询了论坛的朋友，现在基本有个雏形了，总结一下我学到的东西，给这方面的新手参考一下，大家也顺便帮我看看有没有不足之处。

前提如下，我司产品是有抑菌性的液体。我所用的菌种是购买的成品，不需要培养，只用按照说明书稀释。

前期准备如下：1.参考药典无菌检查法，建立培养基验证方案和方法适用性验证方案；2.设备找维科购买的封闭式薄膜过滤器，相关问题都可以直接问供应商，让他们推荐符合你需求的设备；3.因为有20-25℃的培养条件，重新购买了霉菌培养箱（带紫外灯）；4.薄膜过滤需要用到注射吊瓶来将培养基和冲洗液进到滤筒里，吊瓶在淘宝购买，需向客服说明需要高温灭菌，让他们提供耐热的瓶子和带铝盖的盖子，普通橡胶塞灭菌过程中会弹飞。带铝盖的盖子需要对应的夹子，可让客服推荐；5.在无菌室内接种完供试品后，进培养基时，需要把滤筒上的红帽子取下，然后用蓝色三角形堵住滤筒底下，培养基进完剪刀剪断进样管，虚插在呼吸口。再将滤筒拿到阳性对照间，拿一次性无菌注射器吸取菌液注入呼吸口（供应商是说让我把针插过呼吸口的那个滤膜）；6.还没试过滤筒装了培养基稳不稳，供应商有配套支架卖，但是小贵，所以我打算试试，站不稳再买支架。7.我司产品有橡胶塞，可插进样管，我打算直接插了供试品后再用酒精擦一下，再插入冲洗液。

具体操作如下：第一天下午：灭菌500ml生理盐水，1ml和5ml枪头。第二天：上午准备培养基，生理盐水灭菌。灭菌过程中，用前天准备的东西先去制备菌液，下午完成培养基验证和方法适用性。第三天做成品：取一批次的三个供试品，一瓶供试品可供两个滤筒（符合药典最少检验量），我用的是两个一组的滤筒：（1）一个供试品进样到两个滤筒，进样管酒精擦拭后，再插入500ml的生理盐水吊瓶中（相当于冲洗量各250ml）。然后用夹子夹住其中一根进样管，注入100ml培养基。最后取下夹子，夹住另外一根，注入另外一种培养基。做完剪断进样管。（缺点是需要用的吊瓶很多，做完3个供试品需要9个吊瓶，不知道有没有更省的方法。）
（2）阳性对照：1瓶供试品注入2个滤筒，500ml生理盐水注入过滤，加培养基F 200ml，拿到阳性对照间加金葡（阳性对照应该一个就够了，我做两个个主要是还有个滤筒不想浪费）（3）阴性对照：1瓶500ml生理盐水过滤，同供试品夹夹子取夹子，两个滤筒加入两种培养基。（供应商说两种培养基混也是混一点，达不到培养量，是可以这么操作的）

还没开始做，所以做的过程中还有什么需要注意的吗？如果有人想到，麻烦告知一下，谢谢

猫咪特工 · 发表于 2022-10-31 15:04:55

感谢分享总结支持楼主

仓颉0811 · 发表于 2022-10-31 15:56:18

感谢分享！小红心点上

薛晓鹏 · 发表于 2022-10-31 17:57:19

做无菌的时间有点久哈，你们有几个实验员。

微信vivxorrc · 发表于 2022-10-31 19:43:24

薛晓鹏发表于 2022-10-31 17:57
做无菌的时间有点久哈，你们有几个实验员。

就我一个，主要是要做方法适用性和培养基验证，以后检成品半天就搞完了

微信vivxorrc · 发表于 2022-10-31 19:45:55

薛晓鹏发表于 2022-10-31 17:57
做无菌的时间有点久哈，你们有几个实验员。

抓紧一下一天搞完也行，问题是我瓶子买少了，以后做成品不用那么多，买多了也浪费，就分两天做了

薛晓鹏 · 发表于 2022-11-1 09:01:12

微信vivxorrc 发表于 2022-10-31 19:43
就我一个，主要是要做方法适用性和培养基验证，以后检成品半天就搞完了

噢噢，那复核是质量负责人做吗

微信vivxorrc · 发表于 2022-11-1 09:19:20

薛晓鹏发表于 2022-11-1 09:01
噢噢，那复核是质量负责人做吗

对，也只能这样了吧

李jup5hii6 · 发表于 2022-11-1 09:26:35

楼主，买的菌有提供浓度吗？接种时的菌浓是否要进行验证？还是梯度稀释就行？我不太明白

丹丹学姐 · 发表于 2022-11-1 09:35:14

李jup5hii6 发表于 2022-11-1 09:26
楼主，买的菌有提供浓度吗？接种时的菌浓是否要进行验证？还是梯度稀释就行？我不太明白

商业化的定量菌株是不需要考虑菌浓的，一般是冻干粉的菌球，直接加入溶解剂就好了，COA里会给你菌浓

李jup5hii6 · 发表于 2022-11-1 09:38:40

丹丹学姐发表于 2022-11-1 09:35
商业化的定量菌株是不需要考虑菌浓的，一般是冻干粉的菌球，直接加入溶解剂就好了，COA里会给你菌浓

好的，谢谢

北凉徐凤年 · 发表于 2022-11-1 09:41:10

感谢分享，学习一下

微信vivxorrc · 发表于 2022-11-1 10:12:22

李jup5hii6 发表于 2022-11-1 09:26
楼主，买的菌有提供浓度吗？接种时的菌浓是否要进行验证？还是梯度稀释就行？我不太明白

说明书里有浓度的，都是定量的，按照那个稀释到需要的浓度就好

迷之久远 · 发表于 2022-11-1 17:32:35

其实你可以考虑两种培养基都做阳性的。

微信vivxorrc · 发表于 2022-11-1 18:31:51

迷之久远发表于 2022-11-1 17:32
其实你可以考虑两种培养基都做阳性的。

那要有两种菌，没要求这样我就想省点事

微信vivxorrc · 发表于 2022-11-7 10:51:25

有个问题，注射器注射菌液时，总会冒出来，是培养基加多了？还是注射器针不够长？

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