新型人用狂犬病疫苗在研管线

骅骝骐骥

摘要：狂犬病仍在150多个国家流行。在99%的人类病例中，狂犬病病毒都是通过犬传播的。这种致死率极高的疾病，可以通过在接触狂犬病动物之前和/或之后接种疫苗来预防。但由于多种因素，包括疫苗成本高，暴露后疫苗接种方案相对复杂，需要多次接种疫苗(在严重暴露的情况下，疫苗必须与狂免疫球蛋白结合使用)，缺乏获得医疗保健的机会，以及监测不足等原因，每年约有59000人死于狂犬病。需要新的、价格更低、免疫原性更强的狂犬病疫苗，同时需要改进监测和狗狂犬病控制，以减少人类狂犬病的死亡人数。本文中作者讨论了正在进行临床和临床前测试的新型狂犬病疫苗，并评估了它们取代现有疫苗的潜力。
背景：对狂犬病病毒的保护的相关性被很好地定义。针对狂犬病病毒糖蛋白的中和抗体是这种子弹状病毒的唯一表面蛋白，可以预防疾病。一般来说，滴度大于或等于0.5国际单位（IU）/毫升是血清转换的证据，被认为是保护性的，但应该谨慎看待这一数据。引起溶沙病毒的狂犬病是一组互不相同的病毒。通常由狂犬病病毒检测确定的较高滴度，可能还需要可靠地预防与疫苗株抗原性更远的一些Lyssavirus。诱导免疫球蛋白类活性亲和成熟的B细胞反应需要CD4+T细胞的帮助。虽然狂犬病疫苗尚未对此进行研究，但滤泡型辅助T细胞提供的B细胞帮助最好，它位于淋巴组织内的生发中心，为将幼稚的B细胞分化为长寿抗体分泌细胞和记忆B细胞提供了重要线索。遗传性或获得性B或CD4+T细胞免疫缺陷的个体对狂犬病疫苗的反应不会很好。在这些患者中，暴露后使用RIG是强制性的，接种疫苗后应检查滴度，如果滴度保持在0.5IU/ml以下，则应额外接种疫苗。由于抗体效价检测费用高昂，资源贫乏的国家很少遵循这一方案。已上市人用狂犬病疫苗目前我国上市的狂犬疫苗可分为四类，分别为人二倍体细胞疫苗、鸡胚细胞纯化疫苗、Vero细胞纯化疫苗和地鼠肾细胞纯化疫苗，四类疫苗具体对比信息参见下图表。狂犬疫苗的生产企业较多并且以Vero细胞为主，受累于2018年长生疫苗事件影响，狂犬疫苗批签发2018-19年有所下滑，2020年开始逐步恢复，2021年继续维持增长态势。以Vero细胞为基质的狂犬病疫苗生产企业主要是成大生物、荣安生物、大连雅立峰、依生生物、诺诚生物等，其中康华生物是目前唯一生产人二倍体狂苗的企业，康泰生物的人二倍体狂苗已在2021.11申报生产，有望2022上市。未来2-3年人二倍体狂苗的生产企业有望逐步增加，叠加市场认知度逐步提升，我们预计人二倍体狂苗疫苗有望成为狂苗市场的主要参与者之一。

人用狂犬病疫苗当前发展第二代人用疫苗通常是为了减少不良事件或提高现有疫苗的效力而开发的。虽然早期的第一代神经组织狂犬病疫苗具有高度的反应性，但目前的疫苗具有极好的安全性，严重的不良反应很少。现有的狂犬病疫苗非常有效，在正确使用的情况下，有免疫失败的报道，但非常罕见。推动新狂犬病疫苗开发的主要是经济因素，而不是对安全性或缺乏效力的担忧。降低成本，优先采用单一免疫方案，对于扩大暴露前预防(PrEP)并将其纳入高度流行地区的儿童免疫计划将特别有价值。秘鲁已经验证了更广泛的PrEP的有效性。这个国家通过将狂犬病疫苗纳入常规儿童免疫项目，成功地阻止了亚马逊地区吸血蝙蝠传播的狂犬病在儿童中的发病率上升。然而，目前对儿童PrEP使用狂犬病疫苗并不划算，这就需要开发更便宜、更具免疫原性的单剂疫苗，这种疫苗稳定，不需要冷链储存，可以优先口服或无针注射。PrEP和PEP使用相同的狂犬病疫苗。PREP的目的是诱导狂犬病病毒的持续滴度，中和抗体和免疫记忆。PEP的目标是在潜在暴露后刺激快速中和抗体反应。最初由IgM组成的短命抗体反应发生在生发中心外，不依赖于T细胞的帮助。中和IgM抗体在几天内出现，如对小鼠的研究表明，可能有助于保护。诱导持续亲和力成熟的IgG中和抗体反应和记忆B细胞需要更长的时间，但对PrEP来说是必不可少的。因此，人们可能会争辩说，应该开发不同的疫苗来满足PrEP和PEP的需求。基于编码狂犬病病毒糖蛋白的基因序列的亚单位疫苗可以依靠递送载体在单剂注射后诱导有效和持续的抗体和记忆B细胞反应。基因疫苗首先进入细胞，转录和翻译，并产生足够的蛋白质来诱导免疫反应，这需要时间。因此，尽管基因疫苗非常适合于PrEP，但不应该为PEP开发。另一方面，佐剂狂犬病疫苗、基于基因改造狂犬病病毒的疫苗或蛋白质疫苗适合于PEP。蛋白质疫苗狂犬病病毒糖蛋白以同源三聚体蛋白的形式聚集在病毒粒子表面，大多数抗原位点都是构象表位，依赖于正确的四元蛋白质结构。制造具有正确结构的高性价比蛋白疫苗仍然是一个挑战，特别是在溶状病毒糖蛋白的晶体结构仍未确定的情况下。然而，已经探索了许多表达系统。基于人类胚胎肾(HEK)293、小仓鼠肾(BHK)-21或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系的哺乳动物表达系统已被测试出不同的成功；它们表现出不同的糖基化模式，这取决于细胞底物和培养条件。以重组杆状病毒或转染黑腹果蝇施耐德2细胞为基础的昆虫细胞表达系统倾向于更高效地表达高产蛋白，但它们通常添加较短的多糖和添加岩藻糖和木糖残基。酵母表达系统也是经济有效的，因为它们与只含有甘露糖的糖基化与哺乳动物细胞的糖基化有很大的不同，因此酵母衍生的狂犬病病毒糖蛋白的免疫原性很差。狂犬病病毒糖蛋白也已经在西红柿、胡萝卜、玉米等植物中表达，目的是最终开发出可食用的狂犬病疫苗。在植物中生产外源蛋白具有成本效益，但受到提纯问题的阻碍。后者不会影响可食用疫苗，但到目前为止，用植物源狂犬病病毒糖蛋白口服免疫引起的免疫反应是不同的，总体上低于实现可靠保护所需的免疫反应。由印度古吉拉特邦CPL生物制品公司生产的一种蛋白质纳米颗粒疫苗目前正在印度健康志愿者身上进行第三阶段测试。(https://biospectrumasia.com/article/pdf/9246).。这种疫苗是基于一种重组杆状病毒衍生的糖蛋白，这种糖蛋白经过修饰后可以自我组装成纳米颗粒。没有关于疫苗在I/II期试验中性能的信息。虽然蛋白质疫苗是安全的，但它们可能不符合成本效益。它们需要大量的提纯和添加佐剂。在临床前模型中的实验表明，它们的免疫原性不足以支持单剂方案。带有佐剂的狂犬病疫苗佐剂通过所谓的危险信号增强免疫反应，这些危险信号促使未成熟的树突状细胞成熟为专业的抗原呈递细胞，或者通过提供扩展抗原呈递的抗原库来增强免疫反应。明矾是最常用的佐剂，但其不会增加狂犬病疫苗的免疫应答。基于Toll样受体(TLR)配体的第二代佐剂似乎表现得更好。一种名为鼠兔疫苗的佐剂狂犬病疫苗由Rabipur和一种基于多肌苷酸-多胞苷酸的TLR-3激活佐剂组成，已经完成了II期临床试验。疫苗采用加速方案，第0天接种2剂，第3天接种2剂，第7天接种1剂，并与常规0、3、7、14天给药的Rabipur方案进行比较。鼠兔疫苗耐受性良好。抗体滴度(0.5IU/ml)比无佐剂疫苗提高更快。总体而言，试验显示鼠兔疫苗与目前使用的狂犬病疫苗的效力相当。需要更大规模的试验来评估佐剂疫苗是否可靠地加速狂犬病病毒中和抗体保护性滴度的产生，这将对PEP非常有利。其他佐剂已经与狂犬病疫苗结合进行了临床前测试，总体结果表明它们可以节省剂量。基因编辑狂犬病病毒狂犬病病毒可以通过基因工程进行改造。诸如编码磷蛋白或基质蛋白的基因可以被删除，从而使病毒减毒。带有这种缺失的狂犬病病毒不会在动物身上复制，包括那些免疫缺陷的动物，因此可能是安全的。基质蛋白缺失的狂犬病病毒比磷蛋白缺失或灭活的野生型病毒更具免疫原性。尽管有如此有希望的免疫原性数据，但改良病毒在细胞培养中的生长速度不如野生型病毒，这可能会带来生产问题，并增加疫苗成本。此外，公众对狂犬病活疫苗的接受程度可能会受到限制。除了使用缺失突变体，还开发了携带两到三个糖蛋白基因拷贝的疫苗病毒。在小鼠研究中，灭活病毒显示出比野生型病毒更强的免疫原性。这类病毒，只要它们的生长允许规模化生产，就可以被探索用于PrEP。基因疫苗基因疫苗可分为RNA疫苗、DNA疫苗和病毒载体疫苗。它们有一个共同点，那就是转移的是基因而不是蛋白质抗原。在RNA或DNA疫苗的情况下，该基因只编码狂犬病病毒抗原，这导致了高度集中的免疫反应，不同于病毒载体，病毒载体也诱导T和B细胞对基因载体的抗原产生反应。不同类型的基因疫苗的接种率取决于疫苗载体。病毒载体通常与特定的细胞表面受体结合，因此很容易内化。然而，先前自然感染诱导的针对病毒载体的预先存在的中和抗体会严重抑制它们对转基因产物的摄取和免疫反应。同样，病毒载体不应该重复注射，因为第一次免疫诱导的中和抗体会影响后续加强免疫的效果。这与RNA或DNA疫苗无关。RNA或DNA疫苗在细胞膜上的转移效率相当低，但可以通过各种物理或化学方法来促进。RNA疫苗一项名为CV7201的表达狂犬病病毒糖蛋白的RNA狂犬病疫苗的I期临床试验，在健康的成年志愿者身上测试了三剂方案。该疫苗耐受性良好，但并不是所有接种的个体都能获得保护性抗体滴度，接种一年后滴度下降，在进一步加强免疫后，所有参与者的抗体滴度都没有增加。因此，RNA疫苗明显逊于市面上的疫苗。（有新研发的耐热RNA疫苗）DNA疫苗多项临床前试验表明，给予小鼠或猴子的DNA疫苗在PrEP甚至PEP方案中可预防狂犬病病毒。针对狂犬病以外的其他疾病的DNA疫苗已经在多个I期和II期试验中进行了测试，取得了不同的成功。在IIb阶段的研究中，测试了由DNA疫苗初始疫苗和腺病毒载体增强组成的预防HIV-1感染的主要增强方案，但未能达到终点，并被过早停止。Astellas的CMV疫苗的另一项第三阶段试验也失败了(ClinicalTrials.gov标识符：NCT01877655)。继有希望的II期结果之后，针对致瘤型人乳头瘤病毒相关肿瘤的治疗性DNA疫苗已经启动了额外的III期试验。该疫苗是通过电穿孔传递的，需要指出的是，它的目标是诱导T细胞反应，而不是需要针对B细胞的狂犬病DNA疫苗。到目前为止，所有可用的临床数据表明，DNA疫苗对人类的免疫原性很差。这可以通过改进的输送方法(例如电穿孔)部分地克服。在发展中国家使用这种设备是否可行仍有待探索。病毒载体疫苗不同类型的病毒载体疫苗中最安全和最具免疫原性的是基于E1缺失的腺病毒。腺病毒载体对于E1缺失是安全的，这使得它们具有复制缺陷。与其他病毒载体相比，它们具有特殊的免疫原性有几个潜在的原因。E1缺失减少了病毒抗原的转录，而不影响转基因产物的表达，转基因产物通常是在一个强大的、无处不在的活性启动子的控制下。这使得免疫反应主要集中在转基因产物上，而不是疫苗载体的抗原上。腺病毒载体不能溶解细胞，它们以转录活性形式在低水平持续存在很长一段时间，从而不断地为免疫系统提供内部增强。因此，对腺病毒载体的免疫反应在很长一段时间内保持稳定。非人类血清型已经被传播，这避免了先前存在的针对疫苗载体的中和抗体对疫苗效力的潜在抑制作用。在非人类灵长类动物中，表达狂犬病病毒糖蛋白的腺病毒载体在单次注射后可诱导持久的中和抗体保护性滴度。由于腺病毒持续存在，尽管低剂量以转录活性形式存在，抗体滴度也得以维持。不需要冷链的储存方法已经开发出来，便于在资源贫乏的国家使用这种疫苗。据估计，一旦批量生产，单剂腺病毒狂犬病疫苗的成本将大大低于传统狂犬病疫苗3剂疗程的成本。这反过来将允许它们在高度流行地区的儿童免疫计划中使用。有实验数据的其他重组病毒载体。要么反应性太强，要么缺乏疗效，要么需要关键的强化疗法。此外，它们中的大多数还没有作为疫苗携带者进行临床测试，因此还不清楚是否可以实现符合监管要求的扩大、提纯和释放测试的方法。痘病毒载体已经在实验动物中进行了广泛的测试。它们的免疫原性不如腺病毒载体，后者可能在一定程度上与对疫苗载体的众多抗原的强大免疫反应抑制了对转基因产品的免疫反应有关。基于痘苗病毒的痘病毒载体也是反应性的，而基于更弱的痘病毒(如改良的安卡拉痘苗)的痘病毒载体缺乏疗效。一种基于副流感病毒的狂犬病疫苗在小鼠身上显示出效果，如果在一次强化免疫方案中接种两次，则未探索单剂方案。通过使用高剂量新城疫病毒(NDV)狂犬病疫苗进行单次免疫，可以观察到对狗的长期保护作用。新城疫病毒对禽类有很高的致病性，可传染给人类；重组新城疫病毒对这两个物种的潜在毒性都需要进一步研究。单剂表达狂犬病病毒糖蛋白的减毒伪狂犬病病毒可诱导狗产生中和抗体。这项研究没有评估针对病毒接种实验的保护性。总结下一代人类狂犬病疫苗需要降低PrEP和PEP的成本和剂量。为这两种应用开发不同的疫苗平台可能是有必要的，因为每种应用方式都有其对最佳保护性免疫反应的独特要求。对于诱导长寿命狂犬病病毒中和抗体和单剂后持续记忆B细胞反应的PrEP疫苗，复制缺陷型腺病毒载体可以满足这些要求。目前还没有在相关动物模型(如非人灵长类动物)中临床前显示的人类狂犬病疫苗平台，可以加速PEP上抗体的产生，并允许减少疫苗剂量和潜在的钻机。在临床疾病发作后，仍需要更多研究来防止狂犬病的复制。

猫咪特工

额  人用狂犬   分类是兽用么

不太了解  学习一下

wood295

不太了解  学习一下

细胞培养

感谢分享，学习一下

白sxl6dzng

这玩意还有兽用的么？

下辈子不搞药

白sxl6dzng 发表于 2022-8-1 14:54
这玩意还有兽用的么？

宠物不是也要接种吗