求问：导致菌种库质粒丢失率高的原因

lilililala · 发表于 2022-4-6 11:10:22

欢迎您注册蒲公英

您需要登录才可以下载或查看，没有帐号？立即注册

x

菌种库质粒丢失率传代过程中，传至第十代时质粒丢失率较高，第20代时大部分质粒丢失
这种情况有没有可能和前期建库有关，还是和质粒本身有关系。
整个传代过程都是低温培养，直接用甘油种子无抗性筛选传代。

zw20050203 · 发表于 2022-4-6 13:20:53

这些都没有具体经验，只有从实验解决。

davidzjy · 发表于 2022-4-9 11:06:14

很多质粒是不能稳定传代的这是正常现象
在建立质粒的时候就应该考虑其传代稳定性并且制定适合的增殖/保存方案
这个只能case-by-case 除非发出来大家帮忙否则只能自己去查你选用质粒的特性

lilililala · 发表于 2022-4-11 13:55:19

davidzjy 发表于 2022-4-9 11:06
很多质粒是不能稳定传代的这是正常现象
在建立质粒的时候就应该考虑其传代稳定性并且制定适合的增殖/保 ...

明白，谢谢

king198124 · 发表于 2023-4-17 14:37:23

在进行传代稳定性研究的时候，是容易出现质粒丢失的情况，这跟质粒自身有关系。所以需要以传代稳定性的数据来支撑生产中最大允许的传代代次。

范范aru · 发表于 2024-10-14 13:41:59

质粒在细菌中的传代就是不稳定性的，需要在建立菌种库后做传代稳定性测试，得到的最小传代稳定批次是否能满足发酵的需求，可以就能继续用，不能满足就需要研究后重新建库

机智鼠 · 发表于 2024-10-14 16:17:58

在药学和医疗器械领域，菌种库质粒丢失率高的问题可能与多种因素有关。根据《中国药典》2020年版第四部微生物限度检查法规定，菌种库的建立应遵循严格的操作规程，包括菌种的选择、培养基的选择、培养条件的控制等。

首先，前期建库过程中可能存在问题。如果在建库时没有对菌种进行充分的筛选和鉴定，或者使用了不合适的培养基或培养条件，可能导致菌种库中的质粒丢失率较高。此外，如果建库过程中没有进行适当的抗性筛选，也可能导致质粒丢失率增加。

其次，质粒本身的特性也可能影响其稳定性。不同质粒的稳定性差异较大，有些质粒在传代过程中容易发生突变或丢失。因此，在选择质粒时应尽量选择稳定性较好的质粒。

最后，整个传代过程中的操作也可能影响质粒的稳定性。低温培养虽然有利于保持菌种的活性，但也可能导致质粒的不稳定性。此外，直接用甘油种子无抗性筛选传代可能会引入其他细菌或真菌污染，进一步影响质粒的稳定性。

综上所述，导致菌种库质粒丢失率高的原因可能是多方面的，包括前期建库过程中的问题、质粒本身的特性以及传代过程中的操作。为了降低质粒丢失率，建议在建库过程中进行充分的筛选和鉴定，选择合适的培养基和培养条件；同时，在传代过程中注意操作规范，避免引入污染。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

好吧那就这样吧 · 发表于 2024-10-14 19:18:44

估计还是种子问题