无菌检查的阳性菌加菌方法

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-18 15:52:48

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想要请教一下无菌检测直接接种法中添加供试品在无菌隔离器中完成，阳性菌一般在阳性室中进行添加，那薄膜过滤法是如何进行的，因为用注射器加菌不太符合药典描述的最后一次冲洗的要求，如果供阳全程在阳性室添加，那阳性室C+A的环境是不是不符合无菌操作的要求，还有如果供试品组和供阳组由两个人在不同房间一起进行会不会被挑战。在论坛里搜索了一下，没有得到确定的答案，麻烦解答，谢谢。

Apple1234567816 · 发表于 2022-3-18 16:09:45

我们都是直接用无菌注射器加进去的，方法适用性检查的时候也是这样做。

WickedSunny · 发表于 2022-3-18 16:52:10

QC的问题基本不懂，但是我就溜达~~

依然星期三 · 发表于 2022-3-18 17:33:29

阳性菌c+A加没问题，用注射剂加

58767624 · 发表于 2022-3-19 08:41:19

我也不懂，但是顶一下贴，期待答案。问个问题：你说的注射器加菌不太符合药典描述的最后一次冲洗要求，能提供一下依据吗？

白衣牛仔少年 · 发表于 2022-3-19 10:52:49

先来学习一下

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-21 10:12:00

58767624 发表于 2022-3-19 08:41
我也不懂，但是顶一下贴，期待答案。问个问题：你说的注射器加菌不太符合药典描述的最后一次冲洗要求，能提 ...

中国药典，1101 无菌检查法，　方法适用性试验
薄膜过滤法按供试品的无菌检查要求，取每种培养基规定接种的供试品总量，采用薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入不大于100cfu的试验菌，过滤。加培养基至滤筒内，接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的滤筒内加硫乙醇酸盐流体培养基；接种枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的滤筒内加胰酪大豆胨液体培养基。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养，培养时间不得超过5天。

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-21 10:14:32

因为我也是用无菌注射器加的，但是药典上有这样的操作，就想了解一下有没有更合规的方法。

猫咪特工 · 发表于 2022-3-23 17:25:30

顶一下贴，期待

永聚医药包装 · 发表于 2022-3-26 15:49:16

检测无菌是用的平皿吗？我们是在无菌室将供试品和培养液抽滤到集菌器，把需要接种的集菌器拿到阳性室传代加菌，全程一个人操作，进出更换洁净服就好。

119423371 · 发表于 2022-3-26 16:36:29

怎么确定加的阳性菌数量在100cfu以下，是默认6次梯度稀释就是这个结果吗，和传代次数有关系吗

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-28 13:34:14

119423371 发表于 2022-3-26 16:36
怎么确定加的阳性菌数量在100cfu以下，是默认6次梯度稀释就是这个结果吗，和传代次数有关系吗

我们用的是购买的定量菌株，就按照要求稀释，取100微升就可以了，为了保证小于100cfu，不是还有涂布平板计数嘛。

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-28 15:44:24

119423371 发表于 2022-3-26 16:36
怎么确定加的阳性菌数量在100cfu以下，是默认6次梯度稀释就是这个结果吗，和传代次数有关系吗

在做菌悬液之前可以确定稀释梯度。打个比方，就是代数相同，同一批菌种各挖一耳勺培养做浓菌液，做几支。取一支做稀释梯度，在你觉得适宜的梯度各取1ml放入平皿，放入培养基培养。确定它的稀释梯度，就可以确定这几支的稀释倍数。我觉得如果药典没有规定，可以自己做确认，个人理解。

购买原始菌种后询问厂家原始菌种含菌量大概是多少，然后开始传代，到三代后根据含菌量做相对应的稀释梯度然后培养（比方说菌含量为1.0*10的6次方，我稀释到10的4次方然后取样1ml涂布培养理论上它会长100个左右的菌，低于100个菌的话，那你就用这个稀释梯度10的4次方为菌液、高于100的话那就在对半稀释一次培养理论上就只有50个左右菌了，那你就用这个稀释梯度10的4次方且再对半稀释后的菌为菌液）我是这么操作的，你参考下~
以上两条复制于 [检验及监测] 小于100cfu/ml菌悬液如何制备
你也可以论坛搜索100cfu寻找答案

119423371 · 发表于 2022-3-28 16:31:01

嘀嗒嘀嘀发表于 2022-3-28 15:44
在做菌悬液之前可以确定稀释梯度。打个比方，就是代数相同，同一批菌种各挖一耳勺培养做浓菌液，做几支。 ...

意思是这个要找到合适的梯度稀释（100cfu以下），需要在做阳性对照之前1-2周（培养时间）做，后续用的话就用这个梯度的稀释液做阳性就可以了吗，不然中间有一个培养时间差

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-3-29 09:32:17

119423371 发表于 2022-3-28 16:31
意思是这个要找到合适的梯度稀释（100cfu以下），需要在做阳性对照之前1-2周（培养时间）做，后续用的话 ...

我一直用的定量菌株，对于自己培养传代的菌株不太清楚，所以也是搜一些答案给你，不过我看很多是靠经验、浊度仪之类的，反正能用定量菌株还是定量菌株方便。

119423371 · 发表于 2022-3-29 13:06:12

嘀嗒嘀嘀发表于 2022-3-29 09:32
我一直用的定量菌株，对于自己培养传代的菌株不太清楚，所以也是搜一些答案给你，不过我看很多是靠经验、 ...

多谢指导

昀亦然 · 发表于 2022-10-3 08:26:51

谢谢分享，好好学习！！

微信vivxorrc · 发表于 2022-10-20 14:35:33

楼主你现在怎么做的，无菌室加供试品和培养基，再去阳性对照间加菌吗

小金库 · 发表于 2023-4-27 19:42:04

感谢楼主的分享,学习一下

kzr1994 · 发表于 2024-1-21 18:43:05

楼主这个问题由得到确切答案了吗目前是怎么完成的呢

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