关于初始污染菌验证的小疑问

lf15200357739

       1.初始污染菌用产品接种法进行确认，请问微生物计数法确认怎么做，是先将枯草杆菌黑色变种芽孢水悬液接种到产品上，干燥后，用洗脱液接种药典的5个菌做回收率，看是否达到0.5-2.0，还是用确定的洗脱法，不接种枯草杆菌黑色变种芽孢水悬液，直接用洗脱液进行微生物方法计数呢     
       2.用产品接种法进行确认，请问校正因子，将将枯草杆菌黑色变种芽孢水悬液接种到产品上，干燥后，洗脱，最后琼脂覆盖，跟重复回收法的计算方法是否一致。
       3.若产品过大，也不适合剪碎，请问琼脂覆盖如何做，还是考虑用洗脱液？

DanielKwan

fromzjg 发表于 2022-04-26 08:14
看下GB/T19973.1附录C， 我们现在用的重复回收方法来计算，然后不同的是用TSA和SDA分别测样品的需氧菌，霉菌和酵母菌，最后覆盖再用TSA。你说的用菌做回收是不是按照C.3.2里的做？用枯草杆菌黑色变种芽孢水悬液？这个我没做过，我看大多数用重复回收方法计算的多。

我们用的产品接种法 往产品里加 不大于100cfu得菌 然后加生理盐水 过滤 把滤膜放在培养基上 我们用TSA SDA  请问这个试验 都加什么菌呢 我们 往产品加金葡 过滤得膜放tsa 另一个 往产品加白念 过滤的膜放SDA 就这两种菌 还需要加其他的吗

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fromzjg

DanielKwan 发表于 2022-4-26 09:47
我们用的产品接种法 往产品里加 不大于100cfu得菌 然后加生理盐水 过滤 把滤膜放在培养基上 我们用TSA SD ...

接种法 我们没用，感觉太麻烦还得买菌种，但我看了附录C,总的要求是选用需氧菌芽孢，既然是需氧菌，那用TSA一种计算回收率就可以了，日常测试肯定也是测需氧菌，TSA用的多。或者就用C.3.2.2里面的枯草杆菌黑色变种芽抱。

lf15200357739

还有一个小问题，就是校正因子的计算，发现部分公司的校正因子的计算公式不是参考的国标，而是使用药典的回收率的倒数，作为校正因子，请问哪种方法正确？

fromzjg

lf15200357739 发表于 2022-3-15 13:52
还有一个小问题，就是校正因子的计算，发现部分公司的校正因子的计算公式不是参考的国标，而是使用药典的回 ...

你还特意开了个贴，关于回收率，我认为你可能搞错了，一个是0.5-2，是计数回收率，一个是生物负载回收率，如下图。

lf15200357739

fromzjg 发表于 2022-3-15 14:20
你还特意开了个贴，关于回收率，我认为你可能搞错了，一个是0.5-2，是计数回收率，一个是生物负载回收 ...

我知道呀，但是我看了一下国标，貌似对于采集微生物的技术，需要进行确认，就是用药典的五个菌做回收率，要求是0.5－2.0，然后我看了这个论坛有人上传的文件，有一个是初始污染菌计数法验证方案，里面提到的校正因子，是用药典的那个回收率的公式的倒数，所以我有点迷惑

lf15200357739

fromzjg 发表于 2022-3-15 14:20
你还特意开了个贴，关于回收率，我认为你可能搞错了，一个是0.5-2，是计数回收率，一个是生物负载回收 ...

洗脱法的确定，应该是需要做计数回收率的，但是如果用的产品接种法，我就有点不确定在做微生物计数实验的时候，是否应该将那个菌先接种到产品上，洗脱下来进行微生物计数试验，还是直接洗脱产品，做微生物计数实验

lunmulunmu

按照国标做一次看看，就明白一些了

方雄飞

1.医疗器械按药典1105非无菌药品微生物限度做计数方法适用性试验没有意义。计数方法适用性是为了确保尽可能准确测量成品药品的微生物限度，医疗器械测初始污染菌的目的主要为了灭菌，尤其是辐照灭菌的确认和日常控制。如果想在灭菌前了解产品的抑菌性，参考国标B.8。
2.计算原理一样，见国标的C 3.2示例。
3.用了产品接种法，为啥还要考虑琼脂覆盖？如果不用产品接种法，标准也允许不用琼脂覆盖（C2.2）。想更准确的算校正因子，或者第四次洗下来还是很多微生物，那就多洗几次。

lf15200357739

方雄飞 发表于 2022-3-15 16:21
1.医疗器械按药典1105非无菌药品微生物限度做计数方法适用性试验没有意义。计数方法适用性是为了确保尽可能 ...

好的，谢谢大神

℡晨钟暮鼓

thinkpower

上次听一个中检院老师说，医疗器械都用方法一，因为大部分不溶

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胖虎v14

fromzjg 发表于 2022-3-15 14:20
你还特意开了个贴，关于回收率，我认为你可能搞错了，一个是0.5-2，是计数回收率，一个是生物负载回收 ...

请问回收率是当个菌种还是几种的平均值？例如，初始污染菌方法适用性实验中，我们用三种培养基培养（参照GB/T19973.1）几种菌的回收率分别计算出来了，最后回收率是几种菌的平均值还是按需氧菌、厌氧菌分别计算

fromzjg

胖虎v14 发表于 2022-3-26 13:55
请问回收率是当个菌种还是几种的平均值？例如，初始污染菌方法适用性实验中，我们用三种培养基培养（参照 ...

我们是按药典的几种菌做的培养基适用性检查，回收率是被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。计数方法的回收率也是选用的方法下两种培养基对应的菌分别的比值。生物负载的回收率是计算平均回收率算修正系数。

胖虎v14

fromzjg 发表于 2022-3-28 08:07
我们是按药典的几种菌做的培养基适用性检查，回收率是被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均 ...

初始污染菌要检测厌氧菌么？

胖虎v14

fromzjg 发表于 2022-3-28 08:07
我们是按药典的几种菌做的培养基适用性检查，回收率是被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均 ...

还有一个问题，培养基适用性检查中，每个产品的初始污染菌都要测么？加表面活性剂（我们采用的吐温80）有没有参考文件？

fromzjg

胖虎v14 发表于 2022-3-28 10:04
初始污染菌要检测厌氧菌么？

TSA、SDA两种培养基分别测需氧菌，酵母菌和霉菌。实际工作中不可能满足所有菌都测到。

fromzjg

胖虎v14 发表于 2022-3-28 10:17
还有一个问题，培养基适用性检查中，每个产品的初始污染菌都要测么？加表面活性剂（我们采用的吐温80）有 ...

培养基适用性检查只为了检查购买的商品化培养基的灵敏度，是与对照培养基做比较。方法验证时才需要不同产品做各自适用的洗脱、计数方法的验证。加表面活性剂什么浓度需要制定方法后验证，不同供试品，洗脱浓度不一样的，一般0.05%-0.1%浓度是适宜的。

猫咪特工

路过学习   

胖虎v14

fromzjg 发表于 2022-3-28 14:33
培养基适用性检查只为了检查购买的商品化培养基的灵敏度，是与对照培养基做比较。方法验证时才需要不同产 ...

谢谢，学习到了

DanielKwan

请问 生物负载回收率 TSA SDA 各加什么菌

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DanielKwan

fromzjg 发表于 2022-03-28 08:07
我们是按药典的几种菌做的培养基适用性检查，回收率是被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。计数方法的回收率也是选用的方法下两种培养基对应的菌分别的比值。生物负载的回收率是计算平均回收率算修正系数。

请问 做生物负载回收率 TSA SDA加什么菌 还是和计数方法试验加菌一样？

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