大肠杆菌表达的生物制品种子批质量控制

邹权

      2020版药典三部“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”中规定重组工程菌生产用菌种主种子批检定以下项目：一般应包括培养特性、菌落形态大小、革兰氏等染色方法镜检、对抗生素的抗性、生化反应、培养物纯度、全基因序列测定、目的产物表达量、透射电镜检查、目的基因序列测定、外源基因与宿主基因的检定、外源基因整合于宿主染色体的检定、外源基因拷贝数检定、整合基因稳定性试验、目标产物的鉴别、质粒的酶切图谱等项目。
      想问下其中对抗生素的抗性、生化反应等方法有没有相关的法规要求具体怎么检验？
      还有本公司的种子批检验中有种子活力检验一项，但是根据制定的sop去检验，保存时间长的种子活力不符合制定的质量标准。现在想对该方法进行改进，但是没有相关法规规定，各位前辈有没有相关的经验可以借鉴？

周瑜暗恋大乔

可以把效价法改成液相或者紫外检测，效价测出来结果不太准

andy辉01

1、抗生素检测，可用抗性平板。生化反应检测，应有专门的生化反应仪进行检测。
2、种子活力的标准应该非常宽。种子的初始活力应高于合格标准4个数量级以上。

邹权

andy辉01 发表于 2022-2-18 15:49
1、抗生素检测，可用抗性平板。生化反应检测，应有专门的生化反应仪进行检测。
2、种子活力的标准应该非常 ...

想请教一下，种子活力的检验方法有没有相关规定？

静行

你好，老师，能不能把贵公司的种子质控标准和我分享一下，之前没做过。谢谢

被吹散的婆婆丁

请问一下你们公司种子批传代是什么部门负责的？生产还是检验

邹权

nikonpro 发表于 2023-1-18 16:47
请问一下你们公司种子批传代是什么部门负责的？生产还是检验

我们公司研发部和QC都做过

微影

老师，请教一下，全基因序列测定 你们是如何做的？全基因序列是指的重组质粒的，还是重组工程菌的呢？我们是重组大肠杆菌，是需要将重组质粒的进行全序列测定吗？如果重组毕赤酵母是不是就要测酵母基因组了？

邹权

微影 发表于 2023-1-31 13:36
老师，请教一下，全基因序列测定 你们是如何做的？全基因序列是指的重组质粒的，还是重组工程菌的呢？我们 ...

我们也是重组大肠杆菌，但是没做全基因测序，只是做了目的基因序列测定

微影

邹权 发表于 2023-1-31 17:14
我们也是重组大肠杆菌，但是没做全基因测序，只是做了目的基因序列测定

恩恩！我们也是很纠结，目前将主库的质粒全序测序。老师还请教您一下，重组大肠杆菌外源基因拷贝数您是如何做的呢，是QPCR法吗，如果是QPCR法是选用的哪段基因做内参呢？

邹权

微影 发表于 2023-2-1 09:21
恩恩！我们也是很纠结，目前将主库的质粒全序测序。老师还请教您一下，重组大肠杆菌外源基因拷贝数您是如 ...

质粒拷贝数用的QPCR法，内参用的16s

微影

邹权 发表于 2023-2-1 14:01
质粒拷贝数用的QPCR法，内参用的16s

好的，感谢

YZYZYZ

邹权 发表于 2023-2-1 14:01
质粒拷贝数用的QPCR法，内参用的16s

qPCR需要参考什么法规条款吗？好像没有找到qPCR检测的官方标准方法