微限检查检验量问题

leoleeoa3

微生物限度检查，供试品检查上来就说明“除另有规定外，一把供试品检验量为10ml或10g”，薄膜过滤法又说取相当于1g或1ml的供试品进行检查，平皿法也不可能加10ml的供试品，那开始的这个10g或10ml规定意义在哪里？另外我使用的是薄膜过滤法，那菌液体积占供试品的百分比不大于1%这个还有意义吗？我现在要做的是纯化水的微限检测，就搞不清楚，到底供试品检查室我该需要怎么制备，以及加样量怎么定。

jinwen

纯化水微生物限度检查用的是不锈钢薄膜过滤器，无菌检查中的薄膜过滤法，用的是集菌仪，两个是不同的设备

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leoleeoa3

还有问题就是如果我只做纯化水的微限检测，只要计数方法适用性试验通过，完全可以采用平皿法，不要求非要薄膜过滤法呢？
有没有哪位大哥能详细指导一下呢？

13063113060

leoleeoa3 发表于 2021-8-31 15:15
还有问题就是如果我只做纯化水的微限检测，只要计数方法适用性试验通过，完全可以采用平皿法，不要求非要薄 ...

我也想知道可不可以直接平板法直接测纯化水

leoleeoa3

13063113060 发表于 2021-8-31 15:20
我也想知道可不可以直接平板法直接测纯化水

我仔细看过，无菌检查法是明确说了只要条件允许，要使用薄膜过滤法，微限好像没这个要求，但是又怕自己哪里漏掉或者其他文件有规定。

13063113060

leoleeoa3 发表于 2021-8-31 15:26
我仔细看过，无菌检查法是明确说了只要条件允许，要使用薄膜过滤法，微限好像没这个要求，但是又怕自己哪 ...

都是小白，太难了

328650673

leoleeoa3 发表于 2021-8-31 15:15
还有问题就是如果我只做纯化水的微限检测，只要计数方法适用性试验通过，完全可以采用平皿法，不要求非要薄 ...

药典二部上写的薄膜过滤法呢，具体可不可以我也想知道

amai212

跟着药典做 不要折腾幺蛾子 药典第二部 七划的最后一个 是纯化水。明白的要求你用薄膜过滤法，就算你参考YYT1244  也是薄膜过滤法。 你可以取1ml 待测纯化水。加入50ml左右（这个随便）  生理盐水 抽滤。 药典第四部有详细薄膜过滤法的操作方法的

leoleeoa3

amai212 发表于 2021-8-31 16:36
跟着药典做 不要折腾幺蛾子 药典第二部 七划的最后一个 是纯化水。明白的要求你用薄膜过滤法，就算你参考YY ...

6.4供试品检查
6.4.1检验量
检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2)。
一般应随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml。

薄膜过滤法
除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，
就这两块，关于检验量的我还是没有搞清楚，可以详细说说吗。

空心

举例：样品取10g，溶于100ml水中，取10ml水溶液过滤，贴膜，培养，在这个过程中，10g为检验量，后面的10ml为相当于1g供试品的供试液。

Cold1

jinwen 发表于 2021-8-31 15:55
纯化水微生物限度检查用的是不锈钢薄膜过滤器，无菌检查中的薄膜过滤法，用的是集菌仪，两个是不同的设备

纯化水的微生物检测用的是微生物限度检测仪，配套的不锈钢薄膜过来器；无菌的是集菌仪，没毛病！

行走世间，全是

开始的这个10g或者10ml是要你来配制供试液。
纯化水的检测不就是按药典来吗，取不小于1ml供试液，薄膜过滤法。

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amai212

leoleeoa3 发表于 2021-8-31 17:06
6.4供试品检查
6.4.1检验量
检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2)。

这样说吧  薄膜过滤法要“待检品充分润湿滤膜” 做出来才准确。看药典第四部 167页 薄膜过滤法，先用缓冲液润湿滤膜，再 取1ml待检纯化水与10ml （这个不一定，可以10也可以20.30）无菌生理盐水（或其他缓冲液）均匀混合后，用薄膜过滤法做。有必要的话再用缓冲液冲洗一下滤膜。结果就是1ml的纯化水 含菌落量。

当然纯化水也可以多加几毫升，只要你除一下就能推算。
补充说明 你把待检纯化水  看作“水溶性样品” 可能会好理解点。

leoleeoa3

行走世间，全是 发表于 2021-8-31 18:44
开始的这个10g或者10ml是要你来配制供试液。
纯化水的检测不就是按药典来吗，取不小于1ml供试液，薄膜过滤 ...

那请问纯化水微限检测我是否需要做计数方法适用性试验呢？
如果需要的话供试液制备过程是怎么样？
我目前想法是：测回收率时，试验组供试液制备是10ml样品+89ml稀释液+1ml菌液（＜10000cfu）（因为要求菌液体积占比不超过1%），然后我取10ml（相当于1ml样品，菌＜100cfu）薄膜过滤。  
那是不是后期纯化水的微限检验过程都必须稀释10倍制备供试液，再取合适的量过滤呢？

行走世间，全是

1.我们直接拿药典来做的，如果做我认为只需要做检验量和冲洗量的确认。
2.那么请问加的什么菌，铜绿枯草?
3.你的方法学怎么验证的，后期实验就怎么做，要不你验证的目的是为什么呢！方法学验证就是验证的此检验方法的可行性及与真实结果的接近程度。
4. 就算做方法学你加的菌液的数量也不对呀，药典要求1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。你取了10ml的供试液过滤，相当于每张滤膜上含有不大于1000cfu。

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leoleeoa3

行走世间，全是 发表于 2021-9-1 10:24
1.我们直接拿药典来做的，如果做我认为只需要做检验量和冲洗量的确认。
2.那么请问加的什么菌，铜绿枯草?
3 ...

2.菌种是铜绿和枯草。
3.我上面说的供试液制备方法（试验组供试液制备是10ml样品+89ml稀释液+1ml菌液（＜1000cfu）（因为要求菌液体积占比不超过1%），然后我取10ml（相当于1ml样品，菌＜100cfu）薄膜过滤）是否可行，还有没有更简洁的方案？
4.是我写错了，供试液制备时菌液应该是＜1000/ml的。

行走世间，全是

我们没有做纯化水检验方法的验证，直接把药典的检验方法拿来用了。我认为你完全可以按你的思路来，毕竟有与没有还是有区别的。
如果让我做的话，我只会做检验量和冲洗量的确认。这只是我本人的想法。谢谢

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风中有朵雨做的

“除另有规定外，一般供试品检验量为10ml或10g”是指供试品未作处理的原始检验量，如果是液体，规格是10ml/瓶，就取2个最小包装，就应该2个10ml混匀再取10ml；如果是固体，10g/包，就要2包混匀再取10g；再进行稀释或原液操作。“薄膜过滤法说取相当于1g或1ml的供试品进行检查”就是取以上供试液进行原液或稀释检查，如果稀释成1：10则需要取10ml相当于1g或1ml供试品。如此类推。