无菌检验方法验证中样品份额确认

哈哈+

各位大佬，由于产品太大，只能裁切一部分进行无菌试验（直接接种法），那么在无菌检验方法验证时，要进行样品份额确认吗？或者通过灭菌验证确认产品最大灭菌的地方，无菌试验直接检测最难灭菌的地方？在进行方法适用性试验时，接种不同的菌种要分天接种，以避免交叉污染吗（主要是担心黑曲霉）？以下是方法验证部分内容，望大家给点意见，谢谢。1.1 样品份额（SIP）确认
[size=10.5000pt]1.1.1 条件允许时，试验中应使用整个产品。若由于产品较大或其他因素导致不能使用整个产品时，可以用产品的选定部分（SIP）来代替。选用的SIP充分性应得到证明。

1） 根据产品初始污染菌测试结果，若本产品生物负载均匀分布，则SIP可以是该产品任何部分。从1个产品单元抽取20份样品，分别记录其位置、长度/表面积、按6.1.2操作，若不符合标准，增加样品尺寸，再次测试，直到符合标准。

2） 如果产品上生物负载不均匀分布，选择对灭菌工艺最有严峻挑战的产品部分选择SIP，或者由随机选取的按比例代表制造产品所用的各种材料的产品部分组成SIP。按6.1.2操作，直到符合标准，记录SIP的组成、比例、位置、尺寸等数据。

3） 在未知生物负载分布的情况下，样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品部位。按6.1.2操作，直到符合标准，记录SIP的组成、比例、位置、尺寸等数据。

可在长度、质量、体积、表面积基础上计算SIP。

选SIP依据	产品
表面积	植入物（不可吸收）
质量	粉末、手术服、植入物（可吸收）
长度	管路（直径一致）
体积	杯量流体

[size=10.5000pt]1.1.2 SIP 的生物负载应用以下试验证明：
对20件未灭菌的SIP样品做无菌试验，结果最少应有17件阳性（如85%阳性）。如达不到这个标准，需扩大SIP以满足这个标准。如果样品选用一个完整的产品，不需要符合20件样品的无菌试验中必须要有17件阳性的标准。
2.1 无菌试验方法确认
[size=10.5000pt]2.1.1 直接接种法

2.1.1.1方法适用性和无菌检查

测试前将供试品放入100ml量筒，目测出供试品的大概体积V，则所需培养基用量为10V（培养基用量不少于15ml）。配制硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基各8瓶，每瓶培养基体积为10V。在供试品接种前，硫乙醇酸盐流体培养基氧化层高度不超过培养基高度的1/5，否则用100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20min）迅速冷区，只限加热一次，并应防止被污染。按下列分组操作，将硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20~25℃，接入试验菌的培养不超过5天，其它培养14天。

① 供试品直接浸入硫乙醇酸盐流体培养基中，然后接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌；

② 供试品直接浸入硫乙醇酸盐流体培养基中，然后接入小于100cfu的大肠埃希菌；

③ 供试品直接浸入硫乙醇酸盐流体培养基中，然后接入小于100cfu的生孢梭菌；

④ 在硫乙醇酸盐流体培养基中接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌；

⑤ 在硫乙醇酸盐流体培养基中接入小于100cfu的大肠埃希菌；

⑥ 在硫乙醇酸盐流体培养基中接入小于100cfu的生孢梭菌；

⑦ 将供试品直接浸入硫乙醇酸盐流体培养基中；

⑧ 供试品无菌检查时，取硫乙醇酸盐流体培养基做阴性对照；

⑨ 供试品直接浸入胰酪大豆胨液体培养基中，然后接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌；

⑩ 供试品直接浸入胰酪大豆胨液体培养基中，然后接入小于100cfu的黑曲霉菌；

⑪ 供试品直接浸入胰酪大豆胨液体培养基中，然后接入小于100cfu的白色念珠菌；

⑫ 在胰酪大豆胨液体培养基中接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌；

⑬ 在胰酪大豆胨液体培养基中接入小于100cfu的黑曲霉菌；

⑭ 在胰酪大豆胨液体培养基中接入小于100cfu的白色念珠菌；

⑮ 将供试品直接浸入胰酪大豆胨液体培养基中；

⑯ 供试品无菌检查时，取胰酪大豆胨液体培养基做阴性对照；

6.3.1.2结果判断

其中①②③与④⑤⑥、⑨⑩⑪与⑫⑬⑭相比，如果加入供试品的试验组菌种明显生长良好，则说明供试品在该检验量该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，可以照此检验方法和检查条件进行供试品的无菌检查。反之，则说明有抑菌作用，需更改检验方法。如果差异不明显，可根据6.3.3操作方法，计算加入供试品的试验组菌种回收率，应不低于70%。⑦⑮为供试品的无菌检查，⑧⑯为阴性对照，④⑤⑥⑫⑬⑭为阳性对照。阴性对照应无菌生长，阳性对照应生长良好。

逸清草堂

你的灭菌效果的验证应该能确定了你的日常检测的取样位置了吧，那么应该根据验证的结果取样检测，做无菌的方法的验证的话你菌种不需要每天加，一起操作就可以的

哈哈+

逸清草堂 发表于 2021-2-3 10:21
你的灭菌效果的验证应该能确定了你的日常检测的取样位置了吧，那么应该根据验证的结果取样检测，做无菌的方 ...

目前什么验证都没做，准备先做灭菌验证，再做无菌检验方法验证，所以想把样品份额确认删除，不确定是否可行

果然12

谢谢分享   

Rainn07

楼主解决了吗

CCIM

正需要，感谢分享