请教各位大神，细胞治疗产品如何做培养基模拟灌装实验？

什么都不要

本人医药行业小白一枚，刚刚接触这个行业，所以想请教各位老师一个问题：我们是做干细胞的，如果需要做培养基模拟灌装实验该如何设计？我主要的困惑有以下几点：
1.干细胞原代分离时需要添加很多试剂，需要离心，那么做模拟实验时需要添加这些试剂，需要离心么？如果添加试剂会将TSB稀释，会不会影响灵敏度？离心的话，TSB会有沉淀，该怎么处理？
2.培养周期比较长，培养大约需要15天，期间需要更换培养液，那么模拟实验也需要更换培养液么？
3.细胞一般是在T75中培养，那么我的TSB也要加在T75中么？培养期间培养基水分会挥发，导致培养基变浓稠，也会导致培养基灵敏度改变吧？
总的来说就是细胞培养需要的那些液体试剂到底该不该加进TSB中呢？如果加入会导致TSB浓度改变，我该怎么处理？该不该离心呢？离心的话我怎么保证TSB的浓度不变？这些问题困惑我许久，请老师们指教，谢谢！

liuchaons

没接触过，离心的话，可以模拟离心操作动作、时间，不开机就行了

吴从武

培养的可以模拟其中的一个阶段，比如一次完整的补液和换液的过程。T75瓶子可以采用密封盖的瓶子。

Farman

我先说说我个人的看法吧，培养基模拟灌装的目的是证明你的操作、流程对产品无菌性的风险所在，那么理论上是挑战最差状态，选择培养基模拟灌装时的关键点，比如你的离心操作，培养，如果时间较长的操作，经过风险评估是可以缩短时间的（你说的离心会产生沉淀我不是很理解，培养基配制后不是均匀的溶液么，不是混悬液会沉淀么？没做过不确定）。至于所加试剂，操作模拟到了应该就可以了，不需要完全按照工艺添加（这一点我是结合化药的培养基模拟灌装考虑的，化药培养基模拟也不会按照工艺配方进行添加）。
我是这么理解的，欢迎各位老师指正，带我学习。

long_five

1.干细胞原代分离时需要添加很多试剂，需要离心，那么做模拟实验时需要添加这些试剂，需要离心么？如果添加试剂会将TSB稀释，会不会影响灵敏度？离心的话，TSB会有沉淀，该怎么处理？
加入过程可能会导致污染，建议模拟加入过程，包括加入时间、频次，加入的正常操作。是否加入实际试剂还是加入模拟试剂或TSB，根据情况来定。可以模拟加入，或考虑只做模拟加入的过程，这个经过分析确定。 离心会不会可能造成污染？建议考虑进行模拟离心的过程，模拟离心的时间和操作，是否离心机要旋转以及转速，根据分析来确定。

2.培养周期比较长，培养大约需要15天，期间需要更换培养液，那么模拟实验也需要更换培养液么？
跟前面一样问题，更换过程是一个可能的污染操作，肯定要模拟。具体如何操作实际分析。

3.细胞一般是在T75中培养，那么我的TSB也要加在T75中么？培养期间培养基水分会挥发，导致培养基变浓稠，也会导致培养基灵敏度改变吧？
先做风险分析，风险评估是最关键的。具体操作要不要，因不了解你的具体情况，不敢建议。

什么都不要

liuchaons 发表于 2019-12-24 09:27
没接触过，离心的话，可以模拟离心操作动作、时间，不开机就行了

非常感谢老师的回复，我明白了

什么都不要

Farman 发表于 2019-12-24 09:34
我先说说我个人的看法吧，培养基模拟灌装的目的是证明你的操作、流程对产品无菌性的风险所在，那么理论上是 ...

非常感谢老师的回复，受益匪浅。

什么都不要

吴从武 发表于 2019-12-24 09:30
培养的可以模拟其中的一个阶段，比如一次完整的补液和换液的过程。T75瓶子可以采用密封盖的瓶子。

谢谢老师的回复，就是说我TSB培养时间不需要与培养一代细胞的周期一致是么？

什么都不要

long_five 发表于 2019-12-24 10:47
1.干细胞原代分离时需要添加很多试剂，需要离心，那么做模拟实验时需要添加这些试剂，需要离心么？如果添加 ...

非常感谢老师的回复

吴从武

什么都不要 发表于 2019-12-24 10:55
谢谢老师的回复，就是说我TSB培养时间不需要与培养一代细胞的周期一致是么？

个人理解是这样的，你可以看看GMP附录细胞治疗产品征求意见稿

什么都不要

吴从武 发表于 2019-12-24 11:06
个人理解是这样的，你可以看看GMP附录细胞治疗产品征求意见稿

好的，再次感谢您

验证小白

long_five 发表于 2019-12-24 10:47
1.干细胞原代分离时需要添加很多试剂，需要离心，那么做模拟实验时需要添加这些试剂，需要离心么？如果添加 ...

我也挺纠结培养过程换液这个问题

什么都不要

验证小白 发表于 2020-01-03 13:40
我也挺纠结培养过程换液这个问题

所以老师你们怎么解决的？

来自苹果APP客户端

山顶洞人

验证小白 发表于 2020-1-3 13:40
我也挺纠结培养过程换液这个问题

模拟操作操作带来的污染，不是真的去换液。同理，离心是不利于微生物生长的

stronach

CDE应该有个除菌工艺的指导

grantvickylee

Farman 发表于 2019-12-24 09:34
我先说说我个人的看法吧，培养基模拟灌装的目的是证明你的操作、流程对产品无菌性的风险所在，那么理论上是 ...

支持！重要的是模拟操作的最差条件，但评估的是外源污染引入而已，所以不必太纠结于必须完全模拟不同原料的加入，而重点是时间和暴露程度。

大CC

你们是不是做过细胞治疗产品的培养基模拟实验啦

什么都不要

大CC 发表于 2021-12-23 10:01
你们是不是做过细胞治疗产品的培养基模拟实验啦

是的，做过了

大CC

什么都不要 发表于 2021-12-30 09:04
是的，做过了

老师，可以能借鉴下方案吗 ？

什么都不要

大CC 发表于 2021-12-30 09:24
老师，可以能借鉴下方案吗 ？

不好意思啊，我不太上论坛，文件可以分享给你