细胞怎样传好

bax193532 · 发表于 2018-4-19 17:56:47

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新人请教一下，细胞传代传好要注意哪些，看了老手们传细胞，配液，洗脱，拍打，消化，加营养液从头到尾一根吸管，吸的量也不准。

持久的永恒 · 发表于 2018-4-19 20:09:26

一根移液管肯定不行的吧。
1．首先要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。
2．每天观察细胞形态，观察其一般是否处于健康状态。
3．如发现细胞有污染，应立即采取相关的措施。

bax193532 · 发表于 2018-4-19 20:25:07

每天观察形态不对你是怎么操作，发现污染怎么处理，这里污染了废弃

持久的永恒 · 发表于 2018-4-19 20:57:45

bax193532 发表于 2018-4-19 20:25
每天观察形态不对你是怎么操作，发现污染怎么处理，这里污染了废弃

看其形态有无明显变化哇。污染了一般都作废弃处理了吧。他们用一根移液管不怕污染的么？

bax193532 · 发表于 2018-4-19 21:02:05

形态变化变异了你怎么处理

cnosema · 发表于 2018-4-19 21:23:08

bax193532 发表于 2018-4-19 21:02
形态变化变异了你怎么处理

看看细胞代次，如果和代次有关，得做到心里有数，无论生产规程里允许的最高代次是什么

cnosema · 发表于 2018-4-19 21:25:52

配液指的什么？消化用的胰酶吗？

洗脱和消化你都提到了，是贴壁培养的细胞吗？

bax193532 · 发表于 2018-4-19 21:34:10

配的营养液，胰酶是之前用剩的，有时也现配，今天敲坏一10层细胞工厂郁闷
谢谢回答了这么多

cnosema · 发表于 2018-4-19 21:40:06

bax193532 发表于 2018-4-19 21:34
配的营养液，胰酶是之前用剩的，有时也现配，今天敲坏一10层细胞工厂郁闷
谢谢回答了这么多

营养液？你是说培养基？

这个难道不是每次配一整瓶，慢慢用。用完之后再配下一瓶吗？你们是每次临用现配，只配需要的量？

cnosema · 发表于 2018-4-19 21:44:27

bax193532 发表于 2018-4-19 21:34
配的营养液，胰酶是之前用剩的，有时也现配，今天敲坏一10层细胞工厂郁闷
谢谢回答了这么多

如果，你是比较新的手，先用普通培养瓶练手好了，10层的瓶子是有点贵

你用的是10层的瓶子（T-75大小的），还是10层的Chamber（A3纸大小的）？

已经用到细胞工厂了，是规模化生产了？

bax193532 · 发表于 2018-4-19 21:44:59

不是，临床阶段非生产

bax193532 · 发表于 2018-4-19 22:17:54

我传细胞t25瓶，细胞工厂是别人用的

sobi · 发表于 2018-4-19 22:18:11

消化到位了，一敲细胞就刷刷的掉下来了，你到底使多大力气，瓶子都烂，细胞不建议这么重的物理外力，不如增加消化时间。研发阶段，自己摸索好消化时间。细胞培养，注意无菌，动作快，过分纠结等量平衡，又不是滴定，这些误差你做研发到生产都要考虑进去的，毕竟全手工操作

sobi · 发表于 2018-4-19 22:21:28

细胞传代方法通过前期摸索后，方法要固定下来的，包括配液，消化程序和时间，培养周期等，吸管应该及时更换，防止交叉污染，你们老手这样操作不规范。从无菌角度考虑。

bax193532 · 发表于 2018-4-22 16:05:43

帮看下传的三个细胞

cnosema · 发表于 2018-4-25 21:05:16

bax193532 发表于 2018-4-22 16:05
帮看下传的三个细胞

第一张照片里圆形那些细胞估计是老的/S的细胞？这是传完长了几天的细胞？

第二张照片里，圆形细胞少了不少，不过已经长满了。是到了需要传代的时间了？

第三张，是刚传完的细胞？贴了多长时间了？那些圆形细胞，是贴壁了，还是漂着？传代之后如果已经贴了一段时间了，可以考虑换一下培养基。

bax193532 · 发表于 2018-4-25 21:32:23

三张都是传代五天了，第三张因为细胞瓶盖子没拧紧细胞少，后面又传了一次细胞密度上不来，看形态有没有变异呢，谢谢

cnosema · 发表于 2018-4-25 23:59:21

bax193532 发表于 2018-4-25 21:32
三张都是传代五天了，第三张因为细胞瓶盖子没拧紧细胞少，后面又传了一次细胞密度上不来，看形态有没有变异 ...

第三张因为细胞瓶盖子没拧紧细胞少？

你们是在细胞培养箱里进行培养吗？需要CO2吗，含量多少？细胞瓶盖子是封闭的盖子，还是可以通气的盖子？我没有看出来盖子没拧紧和细胞少的关系哈，提示一下？或者你的意思是，盖子没拧紧，细胞也接少了，这两者之间没有关系，只是因为这2个原因，后面又传了一次细胞？

bax193532 · 发表于 2018-4-26 07:02:20

能加个微信聊吗

bax193532 · 发表于 2018-4-26 07:43:52

接的细胞不少，培养基颜色没变，我也不懂，是同事给我的判断

[生产制造] 细胞怎样传好