葡甲胺的HPLC法检测，文献方法不能重现

不可爱的小静子

各位老师，我最近要做葡甲胺的HPLC法定量，查到了一篇文献，《ＨＰＬＣ法测定瑞格列奈片中葡甲胺的含量》，其中色谱条件为：色谱条件色谱柱：ＳＨＩＳＥＩＤＯ　ＳＰＯＬＡＲ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－磷酸盐缓冲溶液（５ｍＭ磷酸二氢钾，５ｍＭ　１－庚烷磺酸钠，用磷酸调节ｐＨ为２．３）（５∶９５）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为２５℃，采用可变波长紫外检测器，检测波长为１９５ｎｍ，进样量２０μＬ。
我按照此条件进行的试验，确没有发现葡甲胺的色谱峰，请各位帮我分析一下原因，不胜感激

zysx01234

我看了下之前的方法是滴定

1含量：准确称取0.500g供试品于烧杯中，加入约40mL水使其溶解，加入2滴甲基红指示液，用0.1mol/L的HCl滴定液滴定。每毫升0.1mol/L的HCl相当于19.52mg的C7H17NO5。

含量%=        F×V×19.52×100
        M×1000×(1-W)
式中：
F——HCl滴定液（0.1mol/L）的校正值；
      V——供试品所消耗HCl滴定液的体积，mL；
      M——供试品称样量，g；
W——供试品干燥失重，%。

hohomomo

请问，标准品进样后也是没有峰么？

不可爱的小静子

hohomomo 发表于 2017-8-3 10:05
请问，标准品进样后也是没有峰么？

是的，没有峰，出来的峰都是3min左右的溶剂峰，文献中是在4min后出峰，我没发现。

不可爱的小静子

zysx01234 发表于 2017-8-3 09:58
我看了下之前的方法是滴定

1含量：准确称取0.500g供试品于烧杯中，加入约40mL水使其溶解，加入2滴甲 ...

谢谢老师，我看过药典是这个方法，目前葡甲胺是一种辅料，我担心原料药会对滴定结果有影响所以就没有采用，另外药典说的使用HPLC示差折光检测器检测的方法，有的老师说示差折光检测器不稳定所以我也没有采用。您能帮我分析一下我这种方法没有出峰的原因吗？谢谢

zysx01234

不可爱的小静子 发表于 2017-8-3 10:37
谢谢老师，我看过药典是这个方法，目前葡甲胺是一种辅料，我担心原料药会对滴定结果有影响所以就没有采用 ...

会不会流动相酸性太强了啊，具体我也不清楚。

不可爱的小静子

zysx01234 发表于 2017-8-3 10:45
会不会流动相酸性太强了啊，具体我也不清楚。

嗯，好的，谢谢老师，我再摸索一下

zysx01234

不可爱的小静子 发表于 2017-8-3 11:04
嗯，好的，谢谢老师，我再摸索一下

直接用乙腈：水=90：10进行分析看看，另外波长用UV确认下

不可爱的小静子

zysx01234 发表于 2017-8-3 11:06
直接用乙腈：水=90：10进行分析看看，另外波长用UV确认下

好的，谢谢老师

syhorchid

紫外检测波长为195nm，属于紫外的末端吸收，其吸收强度应该很弱，在HPLC中没有发现葡甲胺的色谱峰实属正常！

不可爱的小静子

你的意思是，这个方法不太适用吗？

stupid22273

刚按这个方法做了制剂中葡甲胺含量，但由于是末端吸收和离子对试剂的使用，确实重现性很差，不过出峰是没问题的，出峰时间大概在10min后。
所有后续重新开发了蒸发光方法。