抗生素效价需不需要做方法验证？

846832074

如题，有老师知道吗

jasonzhang6688

要的，我们是做了

静水蓝心

这个需要液相色谱，要滴

快乐的小鱼

需要做

846832074

静水蓝心 发表于 2017-2-23 15:56
这个需要液相色谱，要滴

用的管碟法，需要做？

846832074

jasonzhang6688 发表于 2017-2-23 14:45
要的，我们是做了

用的管碟法，需要做？要怎么做？

846832074

jasonzhang6688 发表于 2017-2-23 14:45
要的，我们是做了

用的管碟法，需要做？怎么做?

jasonzhang6688

846832074 发表于 2017-2-23 16:57
用的管碟法，需要做？怎么做?

给你个参考一下：

1.1 试验方法
研究用标准品：XXXX，批号:XXXX  效价:XXXX。
试验用仪器：培养箱、电子天平、游标卡尺。
标准品溶液  精密称取XXXX标准品适量置50ml量瓶中，加甲醇适量(每1mg标准品约1ml)溶解后，用灭菌水稀释至刻度，使成每1ml含500单位的溶液。取上述溶液10ml，置25ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度(200U/ml)。
高浓度标准品溶液：取2ml(200U/ml)→50ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度。
低浓度标准品溶液：取2ml(200U/ml)→200ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度。
供试品溶液  取本品适量，混匀，研细，精密称取XXXX适量置250ml量瓶中，加磷酸盐甲醇混合溶液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液1份、甲醇3份，混合)150ml，超声处理30分钟，放冷至室温，加上述混合溶液稀释至刻度，制成500U /ml溶液，摇匀，过滤，取续滤液10ml，置25ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度(200U/ml)。
高浓度供试品溶液：取2ml(200U/ml)→50ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度。
低浓度供试品溶液：取2ml(200U/ml)→200ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度。
测定法  按抗生素微生物效价检定法测定。
1.2 专属性
1.2.1辅料溶液
按处方量称取相应的空白辅料，按供试品溶液方法配制。
1.2.2测定结果
辅料不产生抑菌圈，证明辅料不干扰XXXX的测定。
1.3 准确度
称取相当于80%、100%、120%标示量的XXXX并加入相应辅料各三份，按含量测定分析，计算XXXX回收率。
标示量        样品号        XXXX加入量(mg)        空白辅料称样量(mg)        XXXX标准品加入量(mg)        测定值R        回收率
(%)        平均回收率(%)        RSD(%)
80%        80%1-1        99.87        1875.63        100.16        0.9787        98.15        98.3        0.4
        80%2-1        100.08        1861.17                0.9780        97.88               
        80%3-1        100.53        1874.52                0.9921        98.84               
100%        100%1-1        125.95        1875.90        125.33        0.9927        98.78        98.2       
        100%2-1        124.79        1876.82                0.9739        97.81               
        100%3-1        125.04        1875.36                0.9770        97.93               
120%        120%1-1        152.88        1876.05        150.09        1.0097        99.13        98.8       
        120%2-1        153.46        1877.13                1.0181        99.57               
        120%3-1        149.16        1874.26                0.9728        97.89               
1.4精密度
用1批样品，分别配制6份供试品溶液进行测定，计算6份供试品溶液中主成分的含量。
组分        供试品称样量(g)        R值        Pt-fl%        各供试品含量(%)        平均标示含量(%)        RSD(%)
        S1=2.0601        R1=1.0146        4.9%        S1=101.82        102.0        0.4
        S2=2.0548        R2=1.0156        4.4%        S2=102.18               
        S3=2.0416        R3=1.0096        3.8%        S3=102.23               
        S4=2.0492        R4=1.0089        3.9%        S4=101.78               
        S5=2.0526        R5=1.0183        3.5%        S5=102.56               
        S6=2.0875        R6=1.0249        3.6%        S6=101.50               
1.5线性范围
1.5.1 标准品溶液制备
精密称取XXXX标准品适量，加25ml甲醇溶液，再用无菌水稀释成50U/ml的溶液，作为贮备液。采用一剂量法进行试验，剂间比为1:0.8。
精密移取贮备液2ml，置25ml量瓶中，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度，溶液为4U/ml，作为标准品中心浓度C0。
精密移取贮备液1.46ml、1.82ml、2.30ml、2.86ml、3.58ml、4.48ml、6.00ml、6.98ml、8.74ml、10.92ml，分别置50ml量瓶中，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8)定容至刻度，标准品浓度分别为:
标准稀释浓度CK(C1-C10)        C1        C2        C3        C4        C5        C6        C7        C8        C9        C10
标准稀释浓度U/ml        1.46        1.82        2.30        2.86        3.58        4.48        6.00        6.98        8.74        10.92
1.5.2操作过程
取已备好的双碟30只，分为10组，每组3只，每组各碟内间隔的3枚小钢管内分别滴满C1-C10的各浓度溶液，另3枚小钢管内均滴满标准品中心浓度溶液，经培养14－16小时后，逐一测量每个抑菌圈直径。分别求出每组3个碟中心浓度C0所致抑菌圈直径平均值y0及C1-C10的所致抑菌圈直径平均值yk（CK＝C1-C10），计算yk-y0的差数（fk），以fk值为横坐标，以相应的XXXX浓度对数值为纵坐标，绘制标准曲线，并得出回归直线方程。
标准稀释浓度(U/ml)        各浓度对数        中心浓度抑菌圈直径
y0        y0        各剂量抑菌圈直径
yk        yk        fk
(yk-y0)
1.46        0.1644        17.06        17.38        17.38        17.23        15.02        15.02        15.02        14.88        -2.35
                16.96        17.20        17.38                14.48        14.94        14.78               
                17.02        17.18        17.50                14.76        14.88        15.02               
1.82        0.2601        17.34        16.96        17.00        17.28        16.26        15.94        15.50        15.80        -1.48
                17.46        17.46        17.46                15.54        15.68        15.88               
                17.24        17.32        17.28                15.72        15.90        15.78               
2.30        0.3617        16.94        16.94        16.94        16.97        15.48        15.48        16.00        15.83        -1.14
                16.56        17.42        17.04                16.46        16.24        15.32               
                16.88        17.16        16.88                16.18        15.92        15.38               
2.86        0.4564        16.84        16.92        16.92        17.16        15.98        16.18        15.72        16.11        -1.05
                17.22        17.34        17.70                16.14        16.14        16.50               
                16.98        17.32        17.18                16.20        15.94        16.20               
3.58        0.5539        17.92        17.50        17.28        17.27        17.26        17.02        16.68        16.84        -0.43
                16.78        17.00        17.16                17.04        16.58        16.46               
                17.46        17.24        17.10                16.82        16.70        17.02               
4.48        0.6513        17.86        16.88        16.92        17.37        17.06        16.78        17.68        17.29        -0.08
                17.84        17.72        17.00                17.68        17.30        17.26               
                17.68        17.50        16.94                17.18        16.96        17.74               
6.00        0.7782        16.16        16.28        16.14        16.74        17.32        16.82        17.00        17.38        0.64
                17.10        17.66        17.10                17.66        17.66        17.80               
                16.52        16.98        16.72                17.12        17.60        17.44               
6.98        0.8439        17.52        17.36        17.06        17.07        17.08        18.26        18.18        18.01        0.94
                16.94        16.90        16.66                18.36        17.58        17.86               
                17.14        17.22        16.86                18.14        17.92        17.96               
8.74        0.9415        17.26        17.10        16.64        16.70        18.66        18.22        18.20        18.23        1.53
                16.44        16.46        16.30                17.92        18.00        18.38               
                16.58        16.92        16.00                18.42        18.16        18.10               
10.92        1.0382        16.68        16.92        16.50        16.63        18.60        18.54        18.54        18.52        1.89
                16.56        16.56        16.54                18.58        18.58        18.30               
                16.62        16.48        16.80                18.38        18.56        18.62               

静水蓝心

846832074 发表于 2017-2-23 16:55
用的管碟法，需要做？

这个就木经验了，不过应该也是可以做的

846832074

jasonzhang6688 发表于 2017-2-23 17:22
给你个参考一下：

1.1 试验方法

非常感谢，很有指导意义

846832074

jasonzhang6688 发表于 2017-2-23 17:22
给你个参考一下：

1.1 试验方法

还想问一下，效价检查可以参考药品质量标准分析方法验证指导原则吗？看到指导原则上说，本指导原则不涉及生物学测定方法的验证内容。效价属于生物学测定方法吗？

jasonzhang6688

生物学测定方法是指生物制品吧