微生物限度方法适用性检查

yaya19900816 · 发表于 2016-6-14 22:27:44

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请教一下各位，目前我有一个样品，我打算用薄膜过滤法做方法学，1:10供试液取9.9ml加0.1ml菌液，冲洗500ml，一个菌不长。现在我想取1:10供试液1ml和菌100cfu加至200ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液里，全部过膜，然后冲洗，保证每张滤膜取样量为0.1g，这种方法符合2015药典要求吗？不符合药典要求请给出依据，目前我自己没办法找出不符合的依据，但是又觉得不太对。

我是一支蒲公英 · 发表于 2016-6-15 06:55:36

关注中，怎么不试一下加中和剂！

yaya19900816 · 发表于 2016-6-15 07:07:27

按照药典对着找，对应不到中和剂

lifenglin-5@163 · 发表于 2016-6-15 08:02:40

可接受标准是多少？可以取加菌之后的供试液0.5ml或0.2ml，可以增大冲洗量。如果可接受标准是10的三次方，什么挑战菌不生长，如果是细菌，可以尝试1:100稀释级。

不拘小杰 · 发表于 2016-6-15 08:39:01

供试液和菌混合那一步
菌液的比例不能超过混合后液体的1%

yaya19900816 · 发表于 2016-6-15 08:45:15

可接受标准是多少？可以取加菌之后的供试液0.5ml或0.2ml，可以增大冲洗量。如果可接受标准是10的三次方，什 ...[/quote]
可接受标准是1000，采用培养基稀释法做铜绿和枯草到0.1都不长，平皿法（1ml)细菌不长，霉菌回收率只有0.1，我在想菌直接加到1:10的供试液里可能直接就死掉了，再冲洗有用吗

yaya19900816 · 发表于 2016-6-15 08:46:17

供试液和菌混合那一步
菌液的比例不能超过混合后液体的1%[/quote]
没有超过啊，1ml到200ml里之后，再加菌液只有0.5%左右啊

yaya19900816 · 发表于 2016-6-15 08:48:53

可接受标准是1000，采用培养基稀释法做铜绿和枯草到0.1都不长，平皿法（1ml)细菌不长，霉菌回收率只有0.1 ...[/quote]
我还试过取9.9ml供试液加0.1ml菌液，取上述液体1ml转移至200ml蛋白胨里，全部过滤，冲500/膜，铜绿、枯草都没长，所以怀疑1:10供试液直接把菌杀死啦。。。。

lifenglin-5@163 · 发表于 2016-6-17 11:18:28

可接受标准是1000，采用培养基稀释法做铜绿和枯草到0.1都不长，平皿法（1ml)细菌不长，霉菌回收率只有0.1 ...[/quote]
样品的抑菌的作用在适宜条件下微生物室可以恢复生长的，抑菌并不是杀菌。

初学者123 · 发表于 2016-6-30 20:53:35

可以先把1:10供试液进一步稀释成1:50或1:100试试

a72736650 · 发表于 2016-7-1 10:55:08

后面的方法原则上可行。做限度如果高浓度不行肯定要考虑稀释，你的第一个实验的取样量是0.99g（这里其实没必要用0.1ml菌液去卡10ml 保证取样量保证加菌量就好）第二个实验取样量0.1g 方向没错。为了验证记录好写建议把供试液做成1:100，依旧取9.9+0.1（或者10+0.1这个随意）

看起来你也知道样品有抑菌性所以加大了冲洗量这个可以查一下资料看看这个样品的抑菌原理添加中和剂。最好是找到现成的文献，不然的话就把药典上推荐的中和剂都尝试一下吧

yaya19900816 · 发表于 2016-7-8 13:40:12

a72736650 发表于 2016-7-1 10:55
后面的方法原则上可行。做限度如果高浓度不行肯定要考虑稀释，你的第一个实验的取样量是0.99g（这里其实没 ...

谢谢，这个是复方制剂，找中和剂太麻烦，直接稀释效果很好，我选择直接稀释了

sailinyazi · 发表于 2016-7-29 11:24:24

我们也有一个产品是这样，1:10、1:100各取9.9ml与0.1ml菌液混合后，取1ml置滤器中缓冲液800ml冲洗，金葡和枯草就是不长，我今天也打算按你说的做，我觉得可行

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