微生物限度方法学验证

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 13:28:28

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盐酸头孢吡肟粗品微生物限度方法验证，枯草芽孢杆菌回收率不到70%。我们现在的方法是取样品10g，加入到100ml pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中。因为该样品抑菌性很强，我们再进一步稀释成1：100的供试液。取1:100供试液1ml加入到500mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中进行稀释，取全部稀释液薄膜过滤，再用500ml含头孢菌素酶的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，分次冲洗滤膜，每次100ml。最后将滤膜贴在含头孢菌素酶的营养琼脂平皿上。结果回收率只有60%。希望大家给些正确的方法或思路。

可亲可爱 · 发表于 2014-7-21 13:46:05

可以考虑加中和剂.

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 13:49:18

本帖最后由苏州东瑞于 2014-7-21 13:50 编辑

可亲可爱发表于 2014-7-21 13:46
可以考虑加中和剂.

加了头孢菌素酶作为灭活剂，回收率还是差点。如果按照增补版50%-200%就通过验证了

燕朵朵 · 发表于 2014-7-21 14:03:02

考虑下减少冲洗次数及冲洗剂用量~

hongwei2000 · 发表于 2014-7-21 14:09:10

你这是用了培养基稀释法加上薄膜过滤法
已经用到了1：100
最好的办法是加入内酰胺酶

yuansoul · 发表于 2014-7-21 14:11:02

60%以上应该可以。

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 14:13:10

燕朵朵发表于 2014-7-21 14:03
考虑下减少冲洗次数及冲洗剂用量~

一般都是增加冲洗量，回收率会高些。

yuansoul · 发表于 2014-7-21 14:13:12

加入的阳性菌选择青壮年的应该会高一些。不要选择大锅饭时期。

燕朵朵 · 发表于 2014-7-21 14:15:47

冲洗太多对菌液也有损害
另，如楼上的楼上，你过滤前样品稀释到1：100了
薄膜过滤法也是有冲洗次数，冲洗剂数量限制的

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 14:26:45

yuansoul 发表于 2014-7-21 14:13
加入的阳性菌选择青壮年的应该会高一些。不要选择大锅饭时期。

用的是生物梅里埃的定量菌株。

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 14:27:36

hongwei2000 发表于 2014-7-21 14:09
你这是用了培养基稀释法加上薄膜过滤法
已经用到了1：100
最好的办法是加入内酰胺酶

有用到头孢菌素酶

yuansoul · 发表于 2014-7-21 14:29:02

苏州东瑞发表于 2014-7-21 14:26
用的是生物梅里埃的定量菌株。

貌似是稳定期的。我建议用指数生长期的。也可以考虑回收的细菌用做验证，变异选择更耐受菌株。

苏州东瑞 · 发表于 2014-7-21 15:44:13

燕朵朵发表于 2014-7-21 14:15
冲洗太多对菌液也有损害
另，如楼上的楼上，你过滤前样品稀释到1：100了
薄膜过滤法也是有冲洗次数，冲洗 ...

没超过最大冲洗量1000ml/每张膜。另外加菌是最后一次冲洗液中加。

bjlidi · 发表于 2014-7-21 15:56:18

路过学习

奕生有你 · 发表于 2014-8-1 10:51:49

这个样品溶解后供试液的pH值怎么样？适不适合枯草生长？

[检验及监测] 微生物限度方法学验证

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