细菌内毒素的检测

哈儿

各位老师，初次接触“细菌内毒素检测-凝胶限度法”，查看了药典及检验操作规程。第一个步骤，灵敏度能够理解，但是第二个“干扰试验”，就看不明白。例如：最大有效稀释倍数：MVD=CL/λ，举例产品限度是0.5EU/ml，鲎试剂选择0.25EU，那么其最大有效稀释倍数为：1*0.5/ 0.25=2，表达的意思是不是2倍的意思？另外一个公式：MVD=CL/λ 0.03，1*0.5/0.03=16，是不是稀释16倍的意思？在做干扰试验时，其预实验是选择前面的1、2倍来进行检验？还是后面的2、4、8、16倍来进行检验？

机智鼠

在细菌内毒素检测的凝胶限度法中，干扰试验的目的是确定样品是否对鲎试剂的检测灵敏度有影响。最大有效稀释倍数（MVD）的计算公式是CL/λ，其中CL是产品限度，λ是鲎试剂的灵敏度。例如，如果产品限度是0.5EU/ml，选择的鲎试剂灵敏度为0.25EU，那么MVD=0.5/0.25=2，意味着样品可以稀释到2倍而不影响检测结果的准确性。

关于您提到的另一个公式：MVD=CL/λ 0.03，这个公式可能是特定情况下使用的，但通常不适用于标准的干扰试验计算。在实际操作中，预实验的选择应基于首个公式计算得到的MVD值来决定稀释倍数。

根据药典和相关操作规程，干扰试验通常需要测试几个不同稀释倍数的样品，以确认在哪个稀释倍数下，样品不再对鲎试剂的检测产生干扰。这可能包括1、2倍，也可能扩展到更高的倍数如2、4、8、16倍，具体取决于初步计算的MVD值及实验设计。

在进行干扰试验时，建议遵循相关药典规定和检验操作规程的具体指导，以确保实验的准确性和可靠性。

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vugjkhoi

蹲一个专业的回答！

哈儿

vugjkhoi 发表于 2024-9-3 16:09
蹲一个专业的回答！

哈哈，我也希望有老师解答下。其实我的疑惑来源于这个图片的内容，计算MVD时用的是0.03，但是它后面的一句话有说得是用0.25的鲎试剂进行预实验，总感觉没太理解。

可爱的飞龙

哈儿 发表于 2024-9-3 16:18
哈哈，我也希望有老师解答下。其实我的疑惑来源于这个图片的内容，计算MVD时用的是0.03，但是它后面的一 ...

MVD是最大有效稀释倍数，意思是你稀释不能超过这个倍数，因为鲎试剂灵敏度最高也就0.03，再稀释就检不出来了，跟你后面实际使用什么灵敏度的鲎试剂没关系

可爱的飞龙

哈儿 发表于 2024-9-3 16:18
哈哈，我也希望有老师解答下。其实我的疑惑来源于这个图片的内容，计算MVD时用的是0.03，但是它后面的一 ...

这是预实验

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 09:03
这是预实验

嗯，干扰预实验并不是检测时进行的参数，我理解。如图片所示，MVD=2.5*1/0.03=83，即干扰试验时，最大稀释倍数不超过83倍。但是，为何后面有写了一句话“用灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂进行预实验”，如果使用这个灵敏度，那么按照公式计算：MVD=2.5*1/0.25=10，即干扰试验时，最大稀释倍数不超过10倍才是正确的?最后面又写一个结论，取得最小不干扰稀释倍数为20倍。就是这段描述没看懂。。。。。。。

可爱的飞龙

哈儿 发表于 2024-9-4 11:42
嗯，干扰预实验并不是检测时进行的参数，我理解。如图片所示，MVD=2.5*1/0.03=83，即干扰试验时，最大稀 ...

他选用0.25EU/ml的鲎试剂做预实验，是先往供试品里面加了0.25EU内毒素对照制成了供试品阳性的，然后看供试品稀释多少倍的时候不会干扰鲎试剂的凝固，确定了稀释倍数，比如现在他确定了稀释20倍不会干扰，再根据这个倍数和内毒素的限值计算他实际检测时需要多少灵敏度的鲎试剂

可爱的飞龙

选择多少林敏度的鲎试剂也是有推荐的

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 11:58
他选用0.25EU/ml的鲎试剂做预实验，是先往供试品里面加了0.25EU内毒素对照制成了供试品阳性的，然后看供 ...

你回复的前段话我明白了，就是为了确认“供试品稀释多少倍的时候不会干扰鲎试剂的凝固”，但是，我后半部分有点疑惑，预干扰试验不是为正式干扰试验确定稀释倍数吗？再者2.5/20=0.125EU/ml，是指鲎试剂灵敏度需要0.125EU/ml及其以下？

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 11:59
选择多少林敏度的鲎试剂也是有推荐的

再次请教下，我是不是可以按照这个思路理解下“细菌内毒素检测法”其中的凝胶限度法：1、第一步先做鲎试剂灵敏度符合（这一板块确认鲎试剂的灵敏度是否合格，合格后以标示值为准）；2、干扰试验，预干扰试验：指的是根据产品限度L，结合公式MVD=cL/λ0.03计算稀释倍数，例如：产品限度度值为：2.5EU/ML,按公式计算得到83倍，就可以设置稀释倍数为低于或包括83倍（1-83倍）进行稀释，每稀释一个倍数，按照要求进行加样检测，得出稀释倍为20-80倍都可以进行正式干扰试验，选择20倍进行干扰试验，结果符合要求；3、凝胶限度试验：产品限度为2.5EU/ML，使用鲎试剂为0.25EU/ML,按照MVD=cL/λ进行计算，其结果为稀释10倍，进行检测，和上面干扰试验的稀释倍数20倍不同？是不是哪里理解有误？

可爱的飞龙

我试着给你解释一下，干扰预实验是为了确定供试品需要稀释多少倍才不会干扰鲎试剂的凝固，和后续使用什么规格的鲎试剂没有关系，他只确定正式试验的时候供试品需要稀释多少倍，这个确认了，再用限值和倍数确认正式试验需要用什么规格的鲎试剂。          而干扰预试验用什么规格的鲎试剂，我上面那张图片已经有写了，用较低灵敏度的。   第三个，干扰预实验最大稀释多少倍，为什么要用0.03来算，是因为你正式实验时选用的鲎试剂最高灵敏度也只能到0.03，要是稀释的倍数太大，就没意义了。  就像干扰试验你把样品稀释1000倍，10000倍，那肯定没有干扰，干扰试验也能正常做出来没有干扰，但是你确定出来的这个倍数没有意义，因为后面用这个倍数算需要的鲎试剂灵敏度时，没有那么高灵敏度的试剂

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 14:17
我试着给你解释一下，干扰预实验是为了确定供试品需要稀释多少倍才不会干扰鲎试剂的凝固，和后续使用什么规 ...

还是回到这个图片（2019版 中国药品检验标准操作规范  4.2.1.1.4 干扰试验预实验举例）在哪张图片得到的结论为“样品最小不干扰稀释倍数为20”，其使用的鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml，那么其在“正式干扰试验”时，是否应该使用0.25/20=0.125EU/ml的鲎试剂，并且供试品需要稀释20倍来进行正式干扰试验？

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 14:17
我试着给你解释一下，干扰预实验是为了确定供试品需要稀释多少倍才不会干扰鲎试剂的凝固，和后续使用什么规 ...

其实，我有点怀疑图片的内容表述是不是有点问题，预实验中既然用0.03EU/ml来计算MVD，那么其使用的鲎试剂是不是应该也是0.03EU/ml,而不应该是0.25EU/ml鲎试剂来进行预实验？不然你使用0.25EU/ml怎么可能达到20倍？最大也就2.5/0.25=10倍？

可爱的飞龙

这个地方，供试品阳性前面是不凝固的，代表供试品可能会干扰鲎试剂的凝固，稀释到20倍的时候供试品阳性凝固了，代表可能稀释到20倍时不会干扰

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 14:59
这个地方，供试品阳性前面是不凝固的，代表供试品可能会干扰鲎试剂的凝固，稀释到20倍的时候供试品阳性凝固 ...

你之前也说过稀释倍数的问题，最大有效稀释倍数，按照0.25EU/ML鲎试剂灵敏度来讲，限度值为2.5EU/ml，那么其最大有效稀释倍数为10，稀释倍数越大，供试品含量越低，相应对检验越没有干扰。理论上来讲20倍也是没有干扰。那么在产品实际检测时，0.25EU/ML鲎试剂灵敏度来讲，限度值为2.5EU/ml，我是按照10倍还是20倍（已经超过了最大有效稀释倍数）来进行检测呢？

zhcm17

哈儿 发表于 2024-9-4 15:19
你之前也说过稀释倍数的问题，最大有效稀释倍数，按照0.25EU/ML鲎试剂灵敏度来讲，限度值为2.5EU/ml，那 ...

MVD是最大有效稀释倍数，和你用的鲎试剂的灵敏度有关，图片是举例你日常检验使用的是灵敏度0.03EU/ml的鲎试剂，经计算MVD是83，但是干扰试验如果从原液做到稀释80倍工作量是比较大的，因此会做干扰试验预试验。
干扰试验预试验的目的是确定供试品在超过多大稀释倍数时对内毒素检测不存在干扰作用，正式干扰试验就会在预实验确定的最低稀释倍数到MVD间进行，干扰预试验使用的鲎试剂灵敏度和正式干扰试验不一样，正式干扰试验使用的鲎试剂灵敏度和日常检验使用的鲎试剂是一致的。

可爱的飞龙

哈儿 发表于 2024-9-4 15:19
你之前也说过稀释倍数的问题，最大有效稀释倍数，按照0.25EU/ML鲎试剂灵敏度来讲，限度值为2.5EU/ml，那 ...

实际实验时就不该选0.25的来做，举的列子上说了至少要稀释20倍才没干扰，那就应该用0.125EU/ml的鲎试剂来做实验，你把它想的太复杂了。你可以再看一看上下文，预实验说白了，就是用不同浓度的供试品来稀释内毒素对照品，再用对应的鲎试剂来测试是不是凝固，不凝固就代表有干扰，这个里面用到的鲎试剂的灵敏度是标准里直接推荐的，和后面的限值与最大稀释倍数那些都没关系，用这个灵敏度来计算最大有效稀释倍数没意义，你再看一下吧

哈儿

可爱的飞龙 发表于 2024-9-4 15:40
实际实验时就不该选0.25的来做，举的列子上说了至少要稀释20倍才没干扰，那就应该用0.125EU/ml的鲎试剂来 ...

好的，谢谢你。我再琢磨琢磨。

Lily_VIP

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