水蛭含量测定

哈哈哈小白

求教一下老师们，你们是怎么做的啊！！
今天做的水蛭含量最大的迷惑就是不凝固，连计算都算不了，更别谈合格不合格了。
给各位老师说一下我的配制过程
供试品:称量了1g放到了10ml的离心管里，然后手摇晃了晃，然后放到震荡机上就摇起来了。
0.2mol的三羟甲基氨基甲烷溶液:121.14(分子量)*0.2=24.228
配制了100ml，称量了2.4228g
0.1mol的盐酸溶液0.1*100)/12mol=0.8333333333
量取了0.83ml定容到了100ml
40单位的凝血酶:称量了0.59mg定容到了10ml的量瓶
0.5％纤维蛋白原:称量了25mg定容到了5ml的量瓶中，用三羟甲基氨基甲烷溶液溶解并稀释至刻度。
最后吸取了供试品100微升+200微升的0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷溶液，然后保温5分钟。
最后就是滴加的时候，加了很多凝血酶都不凝固，求教各位老师，你们用的纤维蛋白原和凝血酶是这样的吗，现在考虑会不会是它们的原因。目前真的是想不出什么问题了。

ulm

若你无法查找到具体原因的话，建议你拿一个之前已经确认过的样品或对照品，检测一遍，以确认你这整个系统的适用情况，若系统整个测定系统或环境无问题，再考虑样品的问题

wjianyang123

我看了你的试剂配制，很多都有问题。

Yeb27cae4

没做过这个项目。但是0.59mg凝血酶这个称量会不会有问题？百万分之一天平吗？

哈哈哈小白

wjianyang123 发表于 2024-8-20 08:27
我看了你的试剂配制，很多都有问题。

求教老师指点，我们自己察觉不到问题

哈哈哈小白

Yeb27cae4 发表于 2024-8-20 09:16
没做过这个项目。但是0.59mg凝血酶这个称量会不会有问题？百万分之一天平吗？

会不会是太少了，这是我们换算过来的，求教老师指点一下

哈哈哈小白

ulm 发表于 2024-8-20 08:23
若你无法查找到具体原因的话，建议你拿一个之前已经确认过的样品或对照品，检测一遍，以确认你这整个系统的 ...

这是我们头一次做，都是按照自己想的来，不知道该怎么处理了，谢谢老师指点

Yeb27cae4

https://www.docin.com/p-810736415.html你看看这篇对你是否有帮助
另外个人有点疑问（从没做过这个品种的角度）：
1.看图片，凝血酶、纤维蛋白原都是说-20保存的，这两个试剂，是昨天做的时候才第一次开瓶的吗？
2.试剂配制可以参考下上面的文章
3.凝血酶0.59mg应该是不对的，一般来说，我们普遍认为十万分之一天平，要称得相对准确，起码要称10mg，你现在1mg都没到，建议可以试一试把称样量增大

wjianyang123

哈哈哈小白 发表于 2024-8-20 12:28
求教老师指点，我们自己察觉不到问题

首先1、三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液有没有调节PH至7.4？    2、你的凝血酶换算有问题，应该用生理盐水直接稀释配制成每1ml含凝血酶40个单位或10个单位的溶液。 我们6六月份才做了水蛭，很顺利就做了。还有你们水蛭的基源是水蛭还是蚂蟥，水蛭和蚂蟥的凝血酶浓度是不一样的。

wjianyang123

哈哈哈小白 发表于 2024-8-20 12:28
求教老师指点，我们自己察觉不到问题

你也可以把水蛭的照片发出来，我帮你看下哪种基源。

哈哈哈小白

Yeb27cae4 发表于 2024-8-20 14:04
https://www.docin.com/p-810736415.html你看看这篇对你是否有帮助
另外个人有点疑问（从没做过这个品种的 ...

凝血酶和纤维蛋白原前几天已经打开过一次了，刚开始用的时候，还是不凝固，所以我又做了一次，还是不行

哈哈哈小白

Yeb27cae4 发表于 2024-8-20 14:04
https://www.docin.com/p-810736415.html你看看这篇对你是否有帮助
另外个人有点疑问（从没做过这个品种的 ...

好的，谢谢老师指点，我们平时称量对照品也是10mg左右，最低8mg，但是凝血酶这个，药典要求40个单位，然后我们换算好，才称量了0.59mg，定容至5ml量瓶中，得出的是40个单位。如果多称的话，定容的也会更多，最后的浓度还是40个单位的啊。

哈哈哈小白

wjianyang123 发表于 2024-8-20 14:32
首先1、三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液有没有调节PH至7.4？    2、你的凝血酶换算有问题，应该用生理盐水直 ...

1.调ph值了，用0.1的盐酸溶液调的，因为那个三羟甲基氨基甲烷溶液里面就有0.1盐酸，所以用0.1盐酸调的ph，当时有疑问是不是应该用0.1的盐酸调，可是药典除了标注出这两种溶液，就没有别的了。
2.我们凝血酶是680单位的，想求教老师，应该称量多少定容至多少，我估计我们换算的不对，所以才出的问题。

哈哈哈小白

wjianyang123 发表于 2024-8-20 14:39
你也可以把水蛭的照片发出来，我帮你看下哪种基源。

谢谢老师，可是我们都打完粉末了，没有了，所以我没有找到未打粉的水蛭。我明天再去找一下

哈哈哈小白

wjianyang123 发表于 2024-8-20 14:32
首先1、三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液有没有调节PH至7.4？    2、你的凝血酶换算有问题，应该用生理盐水直 ...

请教一下老师，凝血酶680单位一瓶的，如果配制到40单位/ml，需要称量多少，定容至多少

badguy404

谢谢楼主分享！