关于遗传毒性检测的问题

一味愚

公司做CMA申报，参照YYT 0870.2-2019 医疗器械遗传毒性试验 第2部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验，预实验用CHO细胞铺板（8x10^5个接种6孔板/孔），培养24h，加秋水仙素（试过终浓度0.4ug、1ug、4ug/ml，没有明显区别）孵育（试过3h、24h，24h的处于M期会多点），消化离心后用5ml/管加入0.075mol/L氯化钾溶液37℃低渗30min，加入1ml固定液水浴5分钟后离心。5ml/管固定液重悬后水浴30min两次，再常温30min分钟一次（共固定3次）。用200ul固定液重悬细胞后滴片，染色15分钟。发现很多细胞没有破裂，染色体的染色单体区分不开（变成一条而不是X状），做了三次都不理想，不知道应该怎么改进。